选修一--专题五--DNA和蛋白质技术.pptVIP

;一、DNA的粗提取与鉴定

1.实验原理;2.实验设计

(1)实验材料的选取：选用相对较高的生物组织。

(2)破碎细胞获取含DNA滤液;(3)去除滤液中的杂质

①利用DNA在不同浓度的中溶解度不同，通过控

制NaCl溶液浓度去除杂质。

②参加分解蛋白质。

③将滤液放在的恒温水浴箱中保温10～15min。

(4)DNA析出与鉴定

①析出：将处理后的滤液，参加冷却的酒精溶液，静置

后，溶液中会出现丝状物，即为DNA。

②鉴定：用2mol/L的NaCl溶解DNA，参加试剂，沸

水加热，观察溶液是否变蓝。;二、多聚酶链式反响扩增DNA片段

1.PCR技术原理

(1)PCR：的简称，是一种体外迅速扩增DNA

片断的技术。

(2)扩增方向：总是从子链的端向端延伸。

(3)引物特点：是一小段DNA或，能与DNA母链的一段碱

基序列互补配对，用于PCR的引物长度通常为个核

苷酸。

(4)原理：原理。;(5)条件：、分别与两条模板链相结合的两种、

四种脱氧核苷酸、耐热的，同时控制温度，使

DNA复制在体外反复进行。;三、血红蛋白的提取和别离

1.提取和别离的方法

(1)凝胶色谱法

①概念：凝胶色谱法也称作分配色谱法，是根据

别离蛋白质的有效方法。

②原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子

的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度

较慢，而的蛋白质无法进入凝胶内部的

通道，只能在移动，路程，移动速度，

相对分子质量不同的蛋白质因此得以别离。;(2)电泳法

①概念：带电粒子在的作用下发生迁移的过程。

②原理：各种分子的差异以及分子本身的、

不同，使带电分子产生不同的迁移速度。;2.实验操作

(1)样品处理：通过红细胞的洗涤、、等操作收集到

血红蛋白溶液。

(2)粗别离：通过透析去除血红???白溶液中的较

小的杂质。

(3)纯化：通过别离相对分子质量不同的蛋白质。

(4)纯度鉴定：用进行样品纯度鉴定。;1.根本原理

(1)DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14mol/L

的NaCl溶液中的溶解度最低，如下表所示;;由上表可以看出，在NaCl溶液物质的量浓度为2mol/L时，DNA溶解，局部蛋白质发生盐析而生成沉淀，通过过滤可除去局部蛋白质；在NaCl溶液物质的量浓度为0.14mol/L时，DNA析出，过滤可除去溶解的局部蛋白质。

(2)DNA不溶于酒精溶液——参加体积分数为95%的冷却酒精

溶液可使DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质。;(3)DNA不被蛋白酶所水解——嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，加

入嫩肉粉可使蛋白质水解而DNA不被水解。

(4)DNA可被二苯胺染成蓝色——向含DNA的试管中参加二

苯胺并沸水浴，溶液呈现蓝色可确认DNA。;2.方法步骤;方法;(1)实验过程中两次用到蒸馏水，第一次目的是使成熟的鸡

血细胞涨破释放出DNA，第二次目的是稀释NaCl溶液，使

DNA从溶液中析出。

(2)预冷的酒精溶液具有以下优点

①抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解。

②降低分子运动易于形成沉淀析出。

③低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。;(1)制备