DB44_T 2346-2021 木麻黄青枯菌强致病性菌株筛选技术规程.docxVIP

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广东省地方标准

DB44/T2346—2021

木麻黄青枯菌强致病性菌株筛选技术规程

TechnicalregulationsonscreeningstrainsofRalstoniasolanacearumwithhigh

pathogenicitytoCasuarinaspp.

2021-12-07发布2022-03-07实施

广东省市场监督管理局发布

I

DB44/T2346—2021

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4原理与方法 1

5仪器用具 2

6培养基与试剂 2

7病菌分离与纯化 2

8检测鉴定 3

9菌株鉴定 5

10强致病性菌株筛选 5

11菌种保存 5

附录A（资料性）木麻黄青枯菌 6

附录B（规范性）培养基及试验方法 7

附录C（规范性）试验调查表格 11

II

DB44/T2346—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由广东省林业局提出、归口，并组织实施。

本文件起草单位：广东省林业科学研究院。

本文件主要起草人：许秀玉、黎明、余玉娟、徐斌、甘先华、王明怀、张应中、张卫强。

1

DB44/T2346—2021

木麻黄青枯菌强致病性菌株筛选技术规程

1范围

本文件规定了木麻黄青枯菌（Ralstoniasolanacearum）分离与纯化、检测鉴定方法、菌株鉴定、强致病性菌株筛选及菌种保存等技术要求。

本文件适用于木麻黄属植物强致病性青枯菌菌株的筛选。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4789.28-2013食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

青枯菌Ralstoniasolanacearum

病害英文名：BacterialwiltofCasuarina；属细菌界Bacteria，变形菌门Proteobacteria，阝-变形菌纲Betaproteobacteria，伯克氏菌目Burkholderiales，伯克氏菌科Burkholderiaceae，青枯菌属Ralstonia。

病原菌通过根部从病株蔓延至健株，通过土壤、水流进行远距离传播。木麻黄青枯菌的其他信息参见附录A。

3.2

强致病性Strongpathogenicability能让木麻黄植株迅速感病死亡的能力。

3.3

褐梗小枝Brownlignifiedtwigs

基径2mm～5mm的褐色木质化小枝，具多分枝。

3.4

分枝Branch

生长在小枝上的绿色枝条。

3.5

小苗seedling

无性系苗或实生苗，50cm～70cm高。

4原理与方法

2

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青枯病菌菌株间存在着显著的致病性差异，且在木麻黄—青枯菌的病理系统中，木麻黄同时存在水平抗性与垂直抗性，利用不同接种方法、不同抗性植物材料与多菌株交互接种测定的方法，才能准确筛选出强致病性菌株。

5仪器用具

5.1仪器

植物生长培养箱、恒温培养箱、恒温振荡培养箱、电子天平（精度≤0.0001g）、生物显微镜（具照相系统）、超净工作台、高压灭菌锅、高速冷冻离心机(≥12000r/min）、PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、离心机、恒温水浴锅（30℃~95℃)、低温冰箱、纯水机、涡旋振荡器、分光光度计、可调微量加样器等。

5.2用具

镊子、手术剪、解剖刀、量筒、烧杯、培养皿、三角瓶、离心管、试管、接种针、接种环等。

6培养基与试剂

6.1培养基

CPG培养基：按附录B中的B.1规定执行。TTC培养基：按附录B中的B.2规定执行。

6.2试剂

革兰氏染色试剂：按附录B中的B.3规定执行。PCR检测所需试剂：按附录B中的B.4规定执行。2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）

7病菌分离与纯化

7.1病株判断

小枝黄化，稀疏、凋落，枯枝枯梢多；根系发黑腐