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对杀菌或抑菌作用无法区分第62页,共89页,星期日,2025年,2月5日(一)表面消毒剂(surfacedisinfactant)表面消毒剂是指对一切活细胞都有毒性,不能用作活细胞或机体内治疗用的化学药剂。第63页,共89页,星期日,2025年,2月5日5)连续加压蒸汽灭菌法(continuousautoclaving)135~140℃,5-15s,工业上发酵培养基135~150℃,2-6s,牛奶或其它液态食品(超高温灭菌)在发酵行业里也称“连消法”。此法只在大规模的发酵工厂中作培养基灭菌用。主要操作是将培养基在发酵罐外连续不断地进行加热、维持和冷却,然后才进入发酵罐。第30页,共89页,星期日,2025年,2月5日利用温度进行杀菌的定量指标也称热致死时间,指在某一温度下,杀死某微生物的水悬浮液群体所需的最短时间。(1)热死时间(thermaldeathtime)Eg.E.coli在60℃下为10min;Salmonellatyphi(伤寒沙门氏菌)在58℃下为30min等。第31页,共89页,星期日,2025年,2月5日(2)热死温度(thermaldeathpoint)也称热死点,指在一定时间内(一般为10min),杀死某微生物的水悬浮液群体所需的最低温度。Eg.Agrobacteriumtumefaciens(根癌土壤杆菌)为53℃;Erwiniacarotovora(胡萝卜软腐欧文氏菌)为48~51℃等。第32页,共89页,星期日,2025年,2月5日(二)影响加压蒸汽灭菌效果的因素
1.杀菌物体含菌量
不同的微生物个体(包括营养体和孢子)的耐热性是有差别的。一般灭菌物体中的含菌量越高,需要的灭菌时间越长。第33页,共89页,星期日,2025年,2月5日2.灭菌锅内空气排除程度第34页,共89页,星期日,2025年,2月5日在一切利用加压蒸汽灭菌法的场合下,必须做到彻底排除灭菌锅内的残余空气。检验空气是否排尽最好的办法:灭菌锅上同时装有压力表和温度计第35页,共89页,星期日,2025年,2月5日3.灭菌对象的pHpH6.0~8.0时,微生物较不易死亡;pH<6.0时,最易引起死亡。第36页,共89页,星期日,2025年,2月5日4.灭菌对象的体积灭菌对象体积的大小会影响热的传导速率。在实验室工作中,对大容量培养基灭菌时,必须注意相应延长灭菌时间。第37页,共89页,星期日,2025年,2月5日第38页,共89页,星期日,2025年,2月5日5.加热与散热速度根据季节的变化或灭菌物件体积的大小,确定相应的“上磅”(预热速度)或“下磅”(散热)时间。第39页,共89页,星期日,2025年,2月5日(三)高温对培养基成分的有害影响及其防止
1.有害影响高温,尤其是长时间的高温除对培养基中的淀粉成分有促进糊化和水解等少数有利影响外,一般对培养基成分产生很多不利的影响。第40页,共89页,星期日,2025年,2月5日第41页,共89页,星期日,2025年,2月5日第42页,共89页,星期日,2025年,2月5日产生褐变的机制由氨基化合物(氨基酸、肽、蛋白质)与羰基化合物(糖类)间发生复杂的梅拉特反应(maillardreaction)所引起,它在导致培养基褐变的同时,还降低了有关营养物成分,应尽量设法避免。第43页,共89页,星期日,2025年,2月5日2.防止法(1)采用特殊加热灭菌法对易破坏的含糖培养基进行灭菌时,应先将糖液与其他成分分别灭菌后再合并;对含Ca2+或Fe3+的培养基与磷酸盐先作分别灭菌,再混合,不易形成磷酸盐沉淀;对含有在高温下易破坏成分的培养基(如含糖组合培养基)可进行低压灭菌(在112℃即0.57kg/cm2或8磅/英寸2下灭菌15分钟)或间歇灭菌;在大规模发酵工业中,可采用连续加压灭菌法进行培养基的灭菌等。第44页,共89页,星期日,2025年,2月5日(2)过滤除菌法对培养液中某些不耐热的成分可采用过滤除菌法“灭菌”。缺点:无法滤除液体中的病毒和噬菌体。第45页,共89页,星期日,2025年,2月5日各种滤器(filter)例如,滤膜过滤装置、烧结玻璃滤板过滤器、石棉板过滤器(Seitzfilter)、素烧瓷过滤器(Chamberlandcandle)、硅藻土过滤器(Berkefeldcandle)等。第46页,共89页,星期日,2025年,2月5日(3)其他方法加入0.01%EDTA(乙二胺四乙酸)或0.01%NTA(氮川三乙
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