DB34_T2815-2017_羽绒羽毛中沙门氏菌检测方法酶联免疫法_安徽省.docxVIP

ICS61.020

DB34

Y76

安徽省地方标准

DB34/T2815—2017

羽绒羽毛中沙门氏菌检测方法酶联免疫法

MethodfordetectionofSalmonellaindownandfeather:Euzymelinked

immunosorbentassay（ELISA）

安徽省质量技术监督局发布

DB34/T2815—2017

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽省检验检疫科学技术研究院提出。

本标准由安徽省动植物检验检疫标准化技术委员会归口。

本标准主要起草单位：安徽省检验检疫科学技术研究院。

本标准主要起草人：孙娟娟、陈雪娇、李云飞、宗凯、郑海松、余晓峰。

I

DB34/T2815—2017

羽绒羽毛中沙门氏菌检测方法酶联免疫法

1

2

范围

本标准规定了羽绒羽毛中沙门氏菌的酶联免疫检测方法。

本标准适用于各种品种、规格的羽绒羽毛及其制品填充料中沙门氏菌的检验。

规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3基本信息

沙门氏菌（salmonella）为革兰氏阴性、两端钝圆的短杆菌，（0.7～1.5μm）×（2～5μm）散在，

无荚膜和芽孢，（除鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌外）都具有周身鞭毛，能运动，大多数具有菌毛，

能吸附于宿主细胞表面或凝集豚鼠红细胞。沙门氏菌具有复杂的抗原结构，一般沙门氏菌具有菌体(O)

抗原、鞭毛(H)抗原和表面抗原(荚膜或包膜抗原)三种抗原，目前已知有2000多种血清型。

根据沙门氏菌在选择性培养基上形成的菌落特征，或根据酶联免疫筛选的阳性结果挑出可疑菌落，

依据进一步的生化鉴定以及血清学鉴定的结果，对沙门氏菌进行判定。

恒温培养箱、冰箱、干热灭菌箱、高压蒸汽灭菌锅、均质器、振荡器、水浴锅、摇床、电子天平、

硝酸纤维素薄膜（0.45μm）、抽滤器、无菌锥形瓶、无菌塑料袋无菌吸管10ml(具0.1ml刻度)或

微量移液器及吸头、无菌培养皿、无菌试管、pH计或pH试纸、全自动免疫酶标分析仪、全自动微生

物生化鉴定系统。

缓冲蛋白胨水（BPW）、四磺酸钠黄绿（TTB）增菌液、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、亚硫酸铋（BS）

琼脂、木糖蓝氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂、沙门氏菌属显色培养基、沙门氏菌O和H诊断血清、生化

鉴定试剂条、生化鉴定卡。

实验用水应符合GB/T6682的规定。培养基的配制见附录A。

1

DB34/T2815—2017

7

检验程序

见图1。

羽绒羽毛中沙门氏菌的检验程序

操作步骤

用无菌镊子和剪刀取出两个各12g样品，称量，精确到0.1g，放入烧杯中，每个烧杯加入1200

ml0.1％蛋白胨生理盐水，室温下，摇床摇匀（160rpm）或机械（加玻璃珠）搅拌3h，无菌纱布过

滤后混合滤液，取2000ml原始滤液，用过滤器经孔径0.45μm滤膜过滤，滤膜取下，放入装有100

mlBPW的均质袋中进行前增菌。36℃±1℃培养18～24h。

轻轻摇动培养过的样品前增菌混合液，移取1ml，转种于10mlTTB中，于42℃±1℃培养18～

2

DB34/T2815—2017

分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个沙门氏菌属显色培养基平板（或

XLD琼脂平板）。于36℃±1℃培养18～24h（沙门氏菌属显色培养基平板）或40～48h（BS琼脂

平板）。

观察各个平板上生长的菌落，各个平板上的菌落特征见表1。

表1沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征

选择性琼脂平板

BS琼脂

沙门氏菌

菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；

有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。

蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；

有些菌株为黄色，中心黑色或全黑色。

HE琼脂

菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部

黑色的菌落；

XLD琼脂

有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心。

沙门氏菌属显色培养基

按照显色培养基的说明进行判定。

用SC或TTB前增菌的混合液，可直接用于全自动免疫酶标分析仪进行初筛，初筛阴性可直接判

定未检出沙门氏菌,初筛阳性须进一步做生化鉴定。

初筛阳性的混合液用接种环划线接种于一个BS琼脂平