DB13T 1108-2009 动物源性食品中泰乐菌素的测定 酶联免疫法.docx

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DB13

河北省地方标准

DB13/T1108—2009

动物源性食品中泰乐菌素的测定酶联免疫法

DeterminationoftylosinresidueinanimalderivedfoodsEnzyme-linkedimmunosorbentassaymethod

2009-05-27发布2009-06-11实施

河北省质量技术监督局发布

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DB13/T1108—2009

前言

本标准由河北省质量技术监督局提出并归口。

本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、河北师范大学生命科学学院、河北医科大学基础医学院、河北省食品安全重点实验室。

本标准主要起草人：张岩、吕品、李挥、李丛芬、刘辰魁、王丽霞、刘敬泽、范斌、周正、康素芬、

周巍。

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DB13/T1108—2009

动物源性食品中泰乐菌素的测定酶联免疫法

1范围

本标准规定了动物源性食品中泰乐菌素残留量的酶联免疫测定方法。

本标准适用于动物组织中泰乐菌素残留量的测定。本部分的方法检出限：10.0μg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

样本中的残留物泰乐菌素与试剂盒中微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗泰乐菌素的抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含泰乐菌素的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出残留物泰乐菌素的含量。

4试剂和材料

除非另有说明，在分析中均为分析纯试剂和GB/T6682中规定的一级水。

4.1泰乐菌素试剂盒：

4.1.196孔板：12条×8孔(包被有偶联抗原)。

4.1.2泰乐菌素标准溶液：0μg/L,1.5μg/L,4.5μg/L,13.5μg/L,40.5μg/L,121.5μg/L。

4.1.3酶标二抗。

4.1.4抗体工作液。

4.1.5底物液A液

4.1.6底物液B液。

4.1.7终止液。

4.1.820倍浓缩洗涤液。

4.1.92倍浓缩复溶液。

4.28%氯化钠溶液：取8.0g氯化钠加水溶解定容至100mL。

4.30.1M氢氧化钠-8%氯化钠溶液：称取0.4g氢氧化钠加8%氯化钠溶液溶解定容至100mL。

4.40.1M盐酸溶液：量取4.15mL浓盐酸，加水定容至500mL。

4.5乙腈-0.1M盐酸溶液：量取84mL无水乙腈和16mL0.1M盐酸溶液混合均匀。

4.6复溶工作液：用水将2倍浓缩复溶液按1:1体积比进行稀释，复溶工作液在4℃环境可保存一个月。

4.7洗涤工作液：用水将20倍浓缩洗涤液按1:19体积比进行稀释，用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月。

4.8无水乙腈。

4.9三氯甲烷。

4.10氯化钠。

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DB13/T1108—2009

4.11盐酸。

5仪器

5.1酶标仪：具450nm滤光片。

5.2多道移液器：50μL～300μL。

5.3单道移液器：20μL～200μL和100μL~1000μL。

5.4漩涡混匀器。

5.5低温离心机。

5.6微孔过滤器：2mL,并带有孔径为0.45μm的水相微孔过滤膜。

5.7旋转蒸发仪。

5.8氮吹仪。

5.9均质器。

5.10振荡器。

5.11天平：感量0.01g。

6分析步骤

6.1提取

准确称取均质样品2.0g(精确到0.01g),置于50mL离心管中，加入8mL乙腈-0.1M盐酸溶液，振荡器振荡5min;3000r/min室温(20℃~25℃)离心10min;移取2mL上清液，加入2mL0.1M氢氧化钠-8%氯化钠溶液，混匀混匀1min,加入8mL三氯甲烷萃取，振荡器振荡5min;室温(20℃~25℃)3000r离心10min,取下层有机相至10mL玻璃试管中，于50℃~60℃氮吹至干；用1mL复

溶工作液溶解干燥后的残留物；取50μL用于分析。

6.2测定

测定中吸取不同的试剂和样品溶液时应更换吸头。

6.2.1分别吸取取50μL泰乐菌素标准工作溶液和样品溶液到对应的微孔中，每孔再加入50μL抗体