DB34_T3861-2021_畜禽血清中黄曲霉毒素B1生物标志物的测定高效液相色谱法_安徽省.docxVIP

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34

安徽省地方标准

DB34/T3861—2021

畜禽血清中黄曲霉毒素B1生物标志物的测

定高效液相色谱法

DeterminationofAFB1biomarkerinserumhighperformanceliquid

chromatographicmethod

安徽省市场监督管理局

发布

DB34/T3861—2021

前

言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则

第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由安徽农业大学提出。

本文件由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司（农业农村部猪肉质量安全控制重点实验

室）、望江县小月山农业发展有限公司、和县农业农村局、望江县畜牧兽医局、安徽省动物疫病预防与

控制中心、安徽省农业科学院畜牧兽医研究所、宿松县春润食品有限公司。

本文件主要起草人：王希春、杨长根、陈祥国、赵家喜、沈艳、高亚飞、王军、汤继顺、赵杰、吴

金节、李玉、冯士彬、孙裴、涂健、冯江华。

I

DB34/T3861—2021

畜禽血清中黄曲霉毒素B1生物标志物的测定高效液相色谱法

1

范围

本文件确立了畜禽血清中黄曲霉毒素B1生物标志物含量的高效液相色谱法测定方法，并规定了测定

原理、试剂和设备、测定步骤、测定结果的表述、重复性、检出限与定量限、回收率。

本文件适用于畜禽血清中AFB1生物标志物的测定。

2

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682

分析实验室用水规格和试验方法

3

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

主要由黄曲霉与寄生曲霉代谢产生的一种真菌毒素，进入体内以后会与血液白蛋白中的赖氨酸

通过蛋白酶的消化，从血清白蛋白中释放出AFB1生物标志物，采用固相萃取柱浓缩。浓缩的AFB1

甲醇（CH3OH）：色谱纯。

蛋白酶。

磷酸二氢铵（NH4H2PO4），分析纯。

1

DB34/T3861—2021

5.1.10氢氧化铵（NH4OH），分析纯。

5.1.11甲酸（HCOOH），分析纯。

5.1.12

5.1.13

AFB1生物标志物标准品AFB1-Lysine（纯度≥99％）。

除另外说明外，本标准所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682的一级水。

5.2

仪器与设备

5.2.1

5.2.2

5.2.3

5.2.4

5.2.5

5.2.6

5.2.7

高效液相色谱仪（含荧光检测器、柱温箱）。

水浴恒温摇床。

固相萃取柱（1cc/30mg）。

粒径5μmC18高效液相色谱柱（?250×4.6mm）。

涡旋振荡器。

微量进样器。

天平（感量0.0001g）。

5.2.8pH计。

5.2.9

-80℃超低温冰箱。

5.2.10

5.2.11

冷冻离心机：转速≥3500g。

紫外分光光度计。

6

测定步骤

6.1

样品制备

无菌采集新鲜血液5mL，室温静置2h，2000g离心15min，取上清液转移至另一离心管中。

4℃下精密称取1mg/mL蛋白标准品置于玻璃管中用于制备标准曲线，各管添加量见表1。

血清总蛋白标准曲线绘制

6.2.1.2取待测血清5μL至离心管中，加入95μL水稀释样品，涡旋混合均匀，然后将4μL稀

释样品转移到预先添加796μL水的玻璃试管中；向所有管中加入200μL考马斯亮蓝G-250，室温

下涡旋，混合均匀转移至待测试管中；以试管1作为空白，在595nm的波长下，使用紫外分光光度

2

DB34/T3861—2021

计进行测量；记录标准品和样品的吸光度读数，根据标准吸光度制作标准曲线，由公式计算可得总蛋白

浓度。

6.2.1.3血清总蛋白含量计算公式见公式（1）、公式（2）、公式（3）：

标准曲线：

yaxb··········································································(1)

X(A-b)······································································(2)

a

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