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激光动态光散射简易操作手册
1、待测样品浓度:对于14kDa的蛋白浓度一般为1mg/ml;28kDa一般为0.5mg/ml。
依此类推
2、样品池为14μl左右,因此一般建议准备20μl。
3、样品一般12,000rpm离心10min,轻取上清。
4、用水冲洗微量取液器和样品池。样品池非常昂贵,请务必小心!
5、微量取液器的针头尽量避免刮到样品池的底部和侧壁。
6、某些样品(高浓度或粒径较大)光散射强度过高时,仪器会出现自保护提示
7、对样品成份及大小需有较好的了解,以利于分析。
一、开机。打开主机和温控两个模块的电源
双击图标,进入程序,显示
可以打开已存在的方法和数据,或可以新建一个方法
二、联机
点击Hardware后点击connect,连接上仪器
Connect后图标变成绿色。选中Parameters,更改其中的相关参数Instrument、
Solvent、Sample。
Instrument:主要参数是激光强度和温度。
Solvent:不通的buffer的折光率和粘连系数是不一样的。此项中选择好Buffer
后参数会自动调整。
Sample:考虑样品的形状。
三、测定
参数设定后,点击即可开始检测。当采集到足够的数据时,再点击一次则数
据采集结束。
四、数据分析
红色数据为超出设定范围的数据,在分析时不采用。一般采集10个显示黑色有
效数据。
Baseline:一般样品的设定偏差为1±0.003,对于纯度非常高的样品可以设置
更小如1±0.001。
SOS:对于均一性不是很好的样品可以不考虑,对于一般较好的样品设定为100。
Intensty:光散射强度。对于均一性较好的样品,此项数据变化幅度较小。
Mvv-R:推测的分子量。
备注:数据过滤。在数据界面,右键,DataFilter。
对于超出偏差范围的数据则显示为红色,并在后期分析中不参与分析。
另外对于某个光散射强度有较大偏动的数据也可以手动去除,右键,Mark。例
如,第3行数据。Mark后即为红色。对于红色数据可以Unmark。
点击图标为分析图
图和数据均可以Copy出来
Peak:每个Peak代表一种物质
R:粒径
%pd:均一性。15以下为非常均一,15~30为一般均一。
%Mass:百分含量
R和%Pd为关注的主要数据。
备注:
对于粒径为0,但是%Mass却是100,往往是由于溶剂造成的,可以忽略;粒
径特别大,但是%Mass却很小的,往往是由于灰尘或溶解的气体造成的,可以
忽略。
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