分子生物学检验技术第3章课件.pptVIP

第三章蛋白质组与蛋白质组学中南大学罗建新分子生物学检验技术第3章

第三章蛋白质组与蛋白质组学DNAmRNA蛋白质转录翻译基因蛋白质细胞特异性基因表达生理状态蛋白质相互作用温度应激状态培养条件药物作用数量有限结构相对稳定复杂性多变性直接反应生命现象复杂的调控分子生物学检验技术第3章

第三章蛋白质组与蛋白质组学

第一节蛋白质组与蛋白质组学的定义第二节蛋白质组及其质点的分离与分析第三节蛋白质相互作用的研究第四节蛋白质数据库及其应用分子生物学检验技术第3章

第一节蛋白质组与蛋白质组学的定义分子生物学检验技术第3章

第一节蛋白质组与蛋白质组学的定义蛋白质组protein+genomeproteome一种基因组所表达的全部蛋白质一个细胞或一个机体的基因所表达的全部蛋白质分子生物学检验技术第3章

蛋白质组学阐明生物体全部蛋白质的表达模式与功能模式从整体的角度分析、鉴定细胞内动态变化的蛋白质的组成、结构、性质、表达水平与修饰状态了解蛋白质之间、蛋白质与大分子之间的相互作用与联系,揭示蛋白质的功能与细胞生命活动的规律一、蛋白质组与蛋白质组学的定义分子生物学检验技术第3章

第二节蛋白质组及其质点的分离与分析

分子生物学检验技术第3章

一、分离纯化第二节蛋白质组及其质点的分离与分析

二、分析鉴定分子生物学检验技术第3章

一、分离纯化（二）破碎细胞（三）蛋白质混合物的分离方法（四）蛋白质分离纯化的条件

（一）选择材料分子生物学检验技术第3章

目的蛋白质的含量提取蛋白质的材料一、分离纯化（一）选择材料分子生物学检验技术第3章

一、分离纯化（二）破碎细胞机械法物理法化学法分子生物学检验技术第3章

根据蛋白质溶解度、分子大小及形状、电离性质、生物学功能的差异进行：1.根据溶解度2.根据分子量透析和超滤平衡离心凝胶过滤层析（三）蛋白质混合物的分离方法一、分离纯化分子生物学检验技术第3章

3.根据电荷毛细管电泳离子交换层析4.根据蛋白质的亲和能力亲和层析一、分离纯化分子生物学检验技术第3章

（四）蛋白质分离纯化的条件缓冲液盐、金属离子和螯合剂还原剂去垢剂蛋白酶抑制剂表面效应蛋白质的环境因素温度储存一、分离纯化分子生物学检验技术第3章

二、分析鉴定（三）图像分析技术（四）放射性核素标记亲和标签法（五）蛋白质芯片技术（六）质谱技术（一）Western印迹技术（二）二维凝胶电泳（2-DE）技术（七）其它方法分子生物学检验技术第3章

二、分析鉴定（一）Western印迹技术基本操作步骤：蛋白样品的制备SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白质的电转移蛋白质与抗体的结合反应目标蛋白质的显示western印迹基本步骤图示分子生物学检验技术第3章

（二）二维凝胶电泳（2-DE)技术

目前蛋白质组研究中最有效的分析鉴定技术之一由两相组成：第一相：等电聚焦凝胶电泳(根据蛋白质电荷差异)第二相：SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳(根据蛋白质分子量差异)二、分析鉴定分子生物学检验技术第3章

二、分析鉴定2-DE技术原理分子生物学检验技术第3章

2-DE分析的基本步骤蛋白质溶解变性还原去除蛋白质杂志利用不同pK固定化电解质配置不同pH范围的凝胶利用软件设计配置第一相电泳(IPG－IFE)平衡第二相电泳(SDS－PAGE)考马斯亮蓝染色银染色铜染色样品制备IPG胶制备双相电泳染色二、分析鉴定分子生物学检验技术第3章

2-DE获得的蛋白质图谱

二、分析鉴定分子生物学检验技术第3章

通过2-DE得到的蛋白质分离图谱，需要经过摄像或扫描转换为以像素为基础的、具有不同灰度强弱和一定边界方向的斑点电脑信号。(三)图像分析技术二、分析鉴定分子生物学检验技术