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43.和蛋白质技术
王后雄艺考特训营理科生物讲义
ＤＮＡ和蛋白质技术
课题一ＤＮＡ的粗提取与鉴定
一、提取的溶解性原理包括哪些方面？
1.在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；不溶于。
①在不同浓度NaCl溶液中溶解度有何特点？要使溶解，需要使用什么浓度？要使
析出，又需要使用什么浓度？
在0.14mol/L时溶解度最小；较高浓度可使溶解；0.14mol/L可使析出。
②在溶解细胞中的时，人们通常选用2mol/LNaCl溶液；将分子析出的方法是向溶有
的NaCl溶液中缓慢注入蒸馏水，以稀释NaCl溶液。是一种常用，但却不能溶于
（特别是95％冷却），但细胞中蛋白质可溶于。
2.从理论上分析，预冷的乙醇溶液具有以下优点。
一是抑制水解酶活性，防止降解；
二是降低分子，易于形成沉淀析出；
三是低温有利于增加分子柔韧性，减少断裂。
3.采用不溶于的原理，可以达到什么目的？将和蛋白质进一步分离。
4.提取还可以利用对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理。利用该原理时，应选用怎样的酶和
怎样的温度值？
蛋白酶，因为酶具有专一性，蛋白酶只水解蛋白质而不会对产生影响。温度值为60～80℃，
因为该温度值蛋白质变性沉淀，而不会变性。
补充：的变性是指分子在高温下解螺旋，其温度在80℃以上，如在PCR技术中变性
温度在95℃。
5.洗涤剂在提取中有何作用？洗涤剂将细胞膜上的蛋白质，从而细胞膜。
6.当鉴定提取出的物质是否是时，需要使用什么指示剂进行鉴定？在沸水浴条件下，遇二
苯胺呈现蓝色。原理总结：通过利用
不同浓度NaCl溶液溶解或析出，可以从细胞中提取和提纯；再利用进一步将与
蛋白质分离开来，达到提纯的目的；最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是。
二、实验材料的选取
不同生物的组织中含量不同。在选取材料时，应本着含量高、材料易得、便于提取的原
则。
本实验用鸡血细胞做实验材料有两个。
一是因为鸡血细胞核的含量丰富，材料易得；
二是鸡血细胞极易吸水，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，
操作繁琐，历时较长。
鸡血细胞破碎以后释放出的，容易被玻璃容器吸附，所以在提取过程中为了减少的损失，
最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液。
三、破碎细胞，获取含的滤液
1、若选用鸡血和洋葱作实验材料，则怎样获取含的滤液？
在鸡血细胞液中加入一定量蒸馏水并用玻棒搅拌，过滤后收集滤液；切碎洋葱，加入一定量洗涤剂
和食盐，搅拌研磨，过滤后收集滤液。
2.为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？
答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加
上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出。
3．在以上实验中，加入蒸馏水、洗涤剂和食盐的作用分别是什么
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