DB3706T 100—2024苹果砧木和品种双脱毒苗木组培繁育技术规范.docxVIP

ICS65.020.20CCSB61

DB3706

烟台市地方标准

DB3706/T100—2024

苹果砧木和品种双脱毒苗木组培繁育技术规范

Technicalspecificationsfortissuecultureandbreedingofapplerootstocksandvarietieswithdoublevirus-freeseedlings

2024-08-30实施2024-07-30发布

2024-08-30实施

烟台市市场监督管理局发布

I

DB3706/T100—2024

目次

前言 Ⅱ

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4外植体类型及取材 1

5无菌体系建立 1

5.1接种工具灭菌 1

5.2外植体消毒 1

5.3转接外植体培养基配方 1

5.4转接外植体培养基配制 1

5.5外植体转接 1

6初代培养 2

6.1初代培养基配方 2

6.2初代培养基配制 2

6.3初代培养环境控制 2

7脱毒处理 2

7.1热处理 2

7.2茎尖剥离 2

7.3茎尖培养 2

7.4病毒检测 2

8脱毒苗继代培养 2

8.1继代培养基配方 2

8.2继代培养条件 3

8.3继代培养污染控制 3

9生根培养 3

9.1生根培养基配方 3

9.2生根培养环境控制 3

9.3生根转接方式及材料要求 3

10脱毒种苗温室驯化 3

10.1驯化时期 3

10.2瓶苗分级 3

10.3驯化流程 3

11移栽管理 3

II

DB3706/T100—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由烟台市农业农村局提出、归口并组织实施。

1

DB3706/T100—2024

苹果砧木和品种双脱毒苗木组培繁育技术规范

1范围

本文件规定了苹果砧木和品种双脱毒苗木繁育的外植体类型及取材、无菌体系建立、初代培养、脱毒处理、脱毒苗继代培养、生根培养、脱毒种苗温室驯化和移栽管理。

本文件适用于烟台地区苹果砧木和品种双脱毒种苗繁育工厂化作业。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4外植体类型及取材

选取当年生枝条的茎尖或茎段。4月～6月，选取大小1.5cm～2.5cm的茎尖；11月～次年2月，选取3cm左右、包含2个腋芽的茎段。

5无菌体系建立

5.1接种工具灭菌

将手术刀、镊子和接种盘等接种工具放置高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌15min。

5.2外植体消毒

5.2.14月～6月在大田选取的外植体消毒流程包括：流水冲洗(2h)→75%的酒精浸泡(20s)→0.1%氯化汞溶液浸泡(5min～7min)→抗坏血酸无菌液(50mg/L)冲洗5遍。

5.2.211月～2月选取的外植体需先在光照培养箱中预培养出新芽，再对新芽进行消毒，其流程包括：0.1%氯化汞溶液浸泡(5min～7min)→抗坏血酸无菌液(50mg/L)冲洗5遍。

5.3转接外植体培养基配方

改良木本植物用培养基(WPM)+300mg/L维生素C+0.5%活性炭+6%琼脂粉+20g/L蔗糖。

5.4转接外植体培养基配制

按照配方煮制培养基。

5.5外植体转接

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消毒好的的外植体用镊子置于接种盘内，用手术刀将每端切割2mm(有叶片的顶芽只保留最上端2片叶),随后接到培养基上。

6初代培养

6.1初代培养基配方

改良WPM+0.5mg/L6-BA+6%琼脂粉+20g/L蔗糖。

6.2初代培养基配制

按