动物肝脏组织基因组DNA的提取（高盐法）.pptxVIP

实验目的本实验旨在学习并掌握动物肝脏组织基因组DNA的提取技术，并学习高盐法的原理和操作步骤。该实验将使用高盐法提取肝脏组织中的基因组DNA，并通过紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测提取的DNA的质量和完整性。JS作者：

实验原理细胞裂解使用高盐溶液裂解细胞，使细胞膜和核膜破裂，释放出DNA。蛋白质消化加入蛋白酶消化细胞内蛋白质，防止蛋白质与DNA结合，干扰DNA提取。DNA沉淀利用高盐浓度和异丙醇，使DNA从溶液中沉淀出来。DNA洗涤用75%的乙醇洗涤DNA沉淀，去除残留的蛋白质和盐类，提高DNA纯度。

实验材料动物肝脏组织新鲜的动物肝脏组织，例如小鼠肝脏组织或猪肝脏组织。应从健康动物中获取，并尽可能保持完整性。试剂Tris-HCl缓冲液EDTASDS蛋白酶KRNaseA氯仿异丙醇75%乙醇TE缓冲液

实验步骤样品准备将动物肝脏组织切成小块，放入冷的PBS缓冲液中洗涤3次，去除血细胞和杂质。细胞裂解将洗净的肝脏组织加入预冷的细胞裂解液中，在冰上裂解30分钟，期间间歇性地用匀浆器研磨组织，确保细胞充分裂解。蛋白质消化将裂解后的样品加入蛋白酶K，在55℃条件下消化2小时，彻底去除蛋白质。DNA沉淀消化完成后，加入高盐溶液，使DNA沉淀下来，离心收集DNA沉淀。DNA洗涤用70%乙醇洗涤沉淀2次，去除残留的蛋白质和盐分，确保DNA纯度。DNA溶解将沉淀用TE缓冲液溶解，得到纯化的DNA溶液。DNA浓度测定使用分光光度计测定DNA浓度，确保得到高质量的DNA样品。

缓冲液配制1溶液1溶解试剂，定容至最终体积。溶液1主要用于细胞裂解，并含有高浓度的盐，可以有效地分离蛋白质和DNA。2溶液2溶解试剂，定容至最终体积。溶液2主要用于蛋白质消化，含有蛋白酶，可以有效地降解细胞中的蛋白质。3溶液3溶解试剂，定容至最终体积。溶液3主要用于DNA沉淀，含有异丙醇，可以有效地沉淀DNA。4溶液4溶解试剂，定容至最终体积。溶液4主要用于DNA洗涤，含有乙醇，可以有效地去除残留的蛋白质和盐。

样品采集与保存11.样品采集选取新鲜、无污染的动物肝脏组织，并用无菌手术刀将其切成小块。22.样品处理将切好的组织块立即浸入预冷的PBS缓冲液中，并将其放入冰盒中冷藏，尽快送往实验室进行后续处理。33.样品保存如果样品无法立即处理，应将其置于-80℃的超低温冰箱中保存，避免样品降解。44.样品标记对每个样品进行清晰的标记，包括样品来源、采集时间、样品编号等信息。

样品预处理样品预处理是提取基因组DNA的关键步骤，确保后续实验的顺利进行。预处理的目标是去除样品中的杂质，例如血细胞、组织碎片和脂肪，并将其分解成更小的颗粒，便于后续步骤的处理。1清洗使用PBS缓冲液冲洗样品，去除表面残留的血液、组织碎片等杂质。2切碎用手术刀将样品切碎，增加细胞暴露面积，提高裂解效率。3研磨使用研磨器对样品进行研磨，进一步破碎组织，释放出细胞核。

细胞裂解细胞裂解是提取动物肝脏组织基因组DNA的关键步骤。通过裂解细胞膜，释放出细胞内的基因组DNA，为后续的提取步骤做好准备。1步骤1添加裂解液2步骤2充分混匀3步骤3孵育4步骤4离心裂解液通常含有盐、去垢剂和蛋白酶等成分，可以有效地破坏细胞膜和蛋白质，释放出DNA。孵育过程中，裂解液需要充分渗透细胞，完全破坏细胞结构。离心后，细胞碎片和蛋白质会沉淀，而DNA则会留在上清液中。

蛋白质消化1蛋白酶添加添加蛋白酶溶液2酶解反应在适宜温度下进行3反应终止加入终止液终止反应4蛋白酶去除通过过滤或沉淀去除蛋白质消化是将蛋白质降解成小分子肽和氨基酸的过程。使用蛋白酶进行消化，需要添加适量的蛋白酶溶液，在适宜温度下进行酶解反应。反应完成后，加入终止液终止反应。最后，通过过滤或沉淀去除蛋白酶，获得消化后的蛋白样品。

DNA沉淀1加入异丙醇将等体积的异丙醇加入到溶液中，在低温下放置一段时间，使DNA沉淀下来。2离心沉淀在低速条件下离心，使沉淀的DNA集中在试管底部。3去除上清液小心地倾倒上清液，保留含有沉淀的DNA的试管。

DNA洗涤70%乙醇洗涤去除残留的盐分和蛋白质等杂质，确保提取的DNA纯度。80%乙醇洗涤进一步去除残留的乙醇，确保DNA沉淀完整性。干燥将DNA沉淀完全干燥，便于后续溶解。

DNA溶解1加入TE缓冲液将DNA沉淀溶解在TE缓冲液中。2充分混匀轻轻摇动或涡旋混匀溶液，确保DNA完全溶解。3静置放置将溶液置于室温或4℃条件下静置一段时间，确保DNA充分溶解。TE缓冲液是一种常用的DNA溶解缓冲液，含有Tris缓冲液和EDTA，可以维持溶液的pH值和抑制DNA酶的活性，确保DNA的稳定性。为了确保DNA完全溶解，在加入TE缓冲液后，需要轻轻摇动或涡旋混匀溶液，使DNA充分接