DB43_T 2816-2023 鱼类粘孢子虫检测方法.docxVIP

ICS65.020.30CCSB44

43

湖南省地方标准

DB43/T2816—2023

鱼类粘孢子虫检测方法

Detectionmethodsoffishmyxosporean

2023-11-09发布2024-02-09实施

湖南省市场监督管理局发布

DB43/T2816—2023

I

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4试剂与材料 1

5仪器与设备 1

6采样 2

7检查步骤 2

8结果判定 3

附录A（规范性）试剂及其配制 4

附录B（资料性）不同粘孢子虫感染症状及包囊形态 5

附录C（资料性）几种常见粘孢子虫成熟孢子形态 6

DB43/T2816—2023

II

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由湖南省农业农村厅提出。

本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：湖南农业大学、湖南应用技术学院、资兴市水产良种场、中国科学院水生生物研究所。

本文件主要起草人：刘新华、任诗思、皮杰、李德亮、向建国、余建波、吕欣荣、刘志辉、叶少文。

DB43/T2816—2023

1

鱼类粘孢子虫检测方法

1范围

本文件给出了湖泊鱼类粘孢子虫检测的试剂与材料、仪器和设备、采样、检查步骤与结果判定方法。本文件适用于鱼类粘孢子虫的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范

SC/T7223.1黏孢子虫病诊断规程第1部分：洪湖碘泡虫

SC/T7223.2黏孢子虫病诊断规程第2部分：吴李碘泡虫

SC/T7223.3黏孢子虫病诊断规程第3部分：武汉单极虫

SC/T7223.4黏孢子虫病诊断规程第4部分：吉陶单极虫

SN/T2503淡水鱼中寄生虫检疫技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4试剂与材料

本标准所使用的试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

4.1乙醇：70%乙醇。

4.2溴酚蓝。

4.310xPCRBufferMIX：-20℃保存，避免反复冻融。

4.4引物序列

上游引物：5’-GATTGACGAGGTCGTTCGTTTA-3’；

下游引物：5’-AGTAGGCCCTTACCCTACTTAC-3’；

本对引物扩增小核糖体小亚基rRNA基因（18SrDNA）的部分序列。

4.5DNAmarker2000（bp）:2000、1000、750、500、250、100。

5仪器与设备

5.1解剖盘、剪刀、镊子、解剖针、解剖刀。

5.2体视显微镜和带测微标尺的光学显微镜。

5.3盖玻片、载玻片、培养皿、巴氏吸管。

5.4恒温水浴锅（控温范围：RT-100℃±1℃)。

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5.5-20℃和-80℃冰箱。

5.6微量移液器（0.5μL～10μL，10μL～100μL，100μL～1000μL）。

5.7PCR扩增仪。

5.8离心管和PCR管。

5.9高压灭菌锅。

5.10超净工作台。

5.11水平电泳系统。

5.12紫外透射仪或凝胶成像系统。

6采样

样品的采集应符合SC/T7103、SC/T7223.1、SC/T7223.2、SC/T7223.3和SC/T7223.4中的相关要求，样品封存和运输应符合SC/T7103的相关规定。

7检查步骤

7.1目检

观察样品，检查顺序应符合SN/T2503中的相关要求，先检查体表部位是否有明显的白色包囊或似包囊状瘤状物，如体表皮肤、鳍、鼻腔、口腔、眼球等，随后解剖鱼体观察内脏是否出现白色包囊，包括体腔、脂肪组织、胃肠、肝、脾等。

7.2镜检

7.2.1当在7.1中发现疑似包囊状物