高美华《医学免疫学》westernblot-zb-第三部分.pptxVIP

高美华《医学免疫学》westernblot-zb-第三部分.pptx

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Westernblot实验技术张蓓

WesternBlot基本原理在电场的作用下将电泳分离的多肽从凝胶转移至一种固相支持体,然后用这种多肽的特异抗体来检测。

实验原理WesternBlot法又称免疫印迹法(IBT),分三个阶段进行。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)。电转移。固相酶免疫测定。

三、固相酶免疫测定检测ENA自身抗体

(一)原理

(二)材料洗涤液:含0.05%吐温-20的pH7.4的PBS酶标抗人IgG阴性对照血清、阳性对照血清底物溶液终止液恒温摇床、微量加样器、反应槽、塑料袋、滴管、吸管等。

(三)方法#2022

用肉眼观察。出现染色条带为阳性,不出现染色条带为阴性,不同的疾病可以出现不同的条带。跟据条带位置判断结果。结果判断抗Sm抗体:同时出现29KD、28KD、13.5KD条带。抗SSA抗体:60KD、52KD任意出现一条带。抗SSB抗体:47KD、45KD应用时出现条带。抗Jo-1抗体:55KD出现条带。抗Scl-70抗体:同时出现86KD、67KD条带。判断标准:

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