高级-生化课件生物化学技术原理与应用.pptVIP

生物化学技术原理及应用;;第一编概述;第一章生命大分子物质的制备;第一节材料的选择与处理;一、材料的选择

;二、材料的处理

;;;第二节确定测定方法;一、目的和要求;二、常用的测定方法;;;;;;;;;第三节细胞的破碎

;1.物理方法;2.化学处理;3.生物方法

;第四节抽提

;一、抽提的含义

;二.抽提有效成分的影响因子;;;;6.氧化

一般蛋白质或酶含有必需集团巯基，假设抽提液

中存在氧化剂或氧分子时，会使巯基形成分子内或分子间二硫键，导致蛋白质变性。为此，常参加2-巯基乙醇、半胱氨酸复原剂。

植物组织和微生物细胞中含酚类物质，在多酚氧化酶作用下，可变为有色的醌类物质。参加苯基硫脲，可抑制这一反响。;;;第五节浓缩;;;;;;;;;第六节纯化方案的设计与评价;一.纯化方案的设计

纯化的总原那么：考虑抽提液中有效成分与杂质的理化性质差异，几种方法组成一个科学合理的纯化方案

切忌：一种方法重复使用;;;第二章沉淀法

;第一节根本原理与沉淀类型

;一、根本原理;二、制备蛋白质;1.盐析法

;;;;;;;;;2.有机溶剂沉淀法;3.蛋白质沉淀法;4.聚乙二醇沉淀法;5.选择性沉淀法;6.结晶沉淀法;三、制备核酸;1.DNA/RNP复合物的解聚;2.多糖等杂质的消除;;;在核酸溶液中参加某些有机溶剂和非离子型

聚合物等试剂时，核酸会被有效沉淀出来。

(1)有机溶剂：乙醇-盐溶液、乙丙醇

(2)聚乙二醇

(3)CTAB;第二节应用实例;一、皮磷酸二酯酶的纯化

;第三章吸附层析;第一节吸附柱层析;一、常用术语;;;;;;;;;;;;二、根本原理;三、吸附剂;;;;;四、洗脱剂;五、层析柱的制备与层析操作;;;;;;六、应用与实例;;;第二节薄层层析;;一、主要操作过程;;;;;二、应用实例;第三节聚酰胺薄层层析;一、根本原理;二、应用实例;第四章疏水层析;;第一节根本原理;一、疏水作用;二、吸附剂;第二节操作与应用;一、层析柱的制备;二、加样与洗脱;三、应用实例;第五章离子交换层析;第一节根本原理〔图〕;;第二节离子交换剂的分类及性质;;一、分类;;;二、性质;;;第三节离子交换剂与缓冲液的选择;一、离子交换剂的选择;;;;二、缓冲液和洗脱液的选择;三、加样量的测定;第四节操作;一、离子交换剂的处理、再生和转型;;二、别离物质的交换;三、物质的洗脱和收集;;第五节应用;一、制备、纯化生命物质;;第六章凝胶过滤;;第一节凝胶的分类及性质;一、葡聚糖凝胶;;;;二、琼脂糖凝胶

;三、聚丙烯酰胺凝胶

;四、Sephacryl

;五、Superdex

;第二节根本原理〔图〕;;;第三节操作;一、凝胶的选择和处理

;;;;二、凝胶柱的制备;;;;三、加样与洗脱;;;四、凝胶柱的再生及保存;;;第四节应用;一、脱盐和浓缩

;二、别离生命物质;;三、去热源物质;四、测定分子质量;用葡聚糖凝胶柱色谱法测定蛋白质分子质量;;第七章亲和层析;第一节根本原理〔图);;第二节操作;一、基质的选择;二、配体的选择;三、亲和吸附剂的制备;四、特异性吸附;五、别离大分子物质;;;六、亲和层析柱的再生;第三节提高吸附剂的操作容量;第四节应用实例;一、纯化大分子物质;;;;;第八章聚焦层析;第一节根本原理;一、多缓冲剂和多缓冲交换剂;;;二、聚焦层析原理;;;;第二节操作;一、多缓冲剂的选择;二、多缓冲交换剂用量确实定;三、多缓冲交换剂的处理;四、样品的准备;五、上样和洗脱;六、样品中多缓冲剂的去除;第三节应用;第九章高效液相色谱;;第一节根本原理(图〕;;一、进样系统;二、输液系统;三、别离系统;四、检测系统;五、数据处理系统;第二节反相高效液相色谱;;一、固定相、流动相和色谱柱;;;;第三节应用;一、定性定量分析;二、测定酶活性;第三篇鉴定方法;第十一章标记;第一节核酸标记;一、标记物的制备及类型;二、非核素标记;;;;;;;;;二、非核素标记;三、核素标记;四、标记物纯化;五、探针的鉴定;第二节蛋白质标记;一、标记方法;二、核素和非核素标记;;;;;第十四章生物芯片;第一节基因芯片;一、根本原理和工作流程;;;;;;二、制备及操作;;;;;;;;;;;三、应用实例;第二节蛋白质芯片;一、原理及特点;;二、制备与操作;;三、应用实例;;第三节芯片实验室;第十五章聚合酶链反响;第一节根本原理;一、反响系统;;;;;;二、反响过程及条件;第二节PCR的类型;第三节