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第三章高效液相色谱分析

高效液相色谱法：以气相色谱为基础，在经典液相色谱实验和技术基础上建立的一种液相色谱法

一、HPLC与经典LC区别

二、HPLC与GC差别

三、高效液相色谱仪流程图

四、特点及应用

一、HPLC与经典LC区别

主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段

1．经典LC：仅做为一种分离手段

柱内径1~3cm，固定相粒径100μm且不均匀

常压输送流动相

柱效低（H↑，n↓）

分析周期长

无法在线检测

2．HPLC：分离和分析

柱内径2~6mm，固定相粒径10μm（球形,均匀装柱）

高压输送流动相

柱效高（H↓，n↑）

分析时间大大缩短

可以在线检测

二、HPLC与GC差别

相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测

主要差别：分析对象的差别和流动相的差别

分析对象

GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，

高沸点、挥发性差、热稳定性差、

离子型及高聚物的样品不可检测

占有机物的20%

HPLC：溶解后能制成溶液的样品，

不受样品挥发性和热稳定性的限制

相对分子质量大、难气化、热稳定性差及高分子

和离子型样品均可检测

用途广泛，占有机物的80%

2．流动相差别

GC：流动相为惰性气体

组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用

HPLC：流动相为液体

流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、

改善分离度增加了因素，对分离起很大作用

流动相种类较多，选择余地广

流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用

选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相

可以增大分离选择性

3．操作条件差别

GC：加温操作

HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）

提高柱内填料装填的均匀性,减小粒度

三、高效液相色谱仪流程图

灵敏度高，重复性好、线性范围宽、死体积小以及对温度和流量的变化不敏感

1．贮液器（滤去颗粒状物质）

2．高压泵（15000~35000KPa)流量稳定

及梯度洗提装置

3．进样装置

4．色谱柱——分离

5．检测器——分析

6．废液出口或组分收集器

7．记录装置

4.6mm或3.9mm

高效液相色谱仪的色谱柱

球形填料

不规则形填料

5~10μm

价格?

HPLC柱=空柱管+填料(分离介质)

空柱管:200-300元

国产填料国产装填=800-1000元

进口填料国产装填=1200-1500元

原装进口柱=2400-3000元

高效液相色谱仪的生产厂家

Waters

Agillent

Shimadz

大连依利特公司

PerkinElmer

Varian

北京东西电子研究所

制造商

高效液相色谱仪LC-2010HT

岛津（香港）有限公司

新一代液相色谱∶Alliance

Alliance

简约企业培训PPT

产品名称：液相色谱仪器

大连依利特

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HPLC的特点和应用

“三高”“一快”“一广”

高柱效(n=3万片/米),柱效高（远高于一般LC）

高灵敏度(紫外检测器最小检出量达纳克级)

高压(150*105~350*105Pa)

分析速度快

应用范围广泛（可分析80%有机化合物）

HPLC应用

医药方面：生物组织、血样、尿样分析，药剂组

分测定，药物生产控制，药代研究。

生化方面：主要用于氨基酸、蛋白质、酶、糠尿。

食品方面：果汁，饮料，酒类等中的添加剂。

环境方面：饮用水，废水中质量标准的控制。

大气、土壤污染研究

正常对照组Fig2(controlgroup)诱导后3天组(Hydrocephalusofthe3day)

诱导后8天组(Hydrocephalusofthe8day)诱导后4月组(Hydrocephalusofthe4month)

狗脑积水不同时期脑组织中肌酸、磷酸肌酸及磷酸腺苷酸的含量变化

Cr

Cr

Cr

Crp

Cr

Crp

Crp

AMP

AMP

AMP

AMP

ADP

ADP

Crp

ADP

ATP

ATP

ATP

ATP

ADP

HPLC法分析心脏衰竭过程中黄连素对心脏能量的保护作用

标准色谱图心肌样品色谱图

Cr

Crp

AMP

AMP

Cr

Crp

ADP

ADP

ATP

ATP

标准品色谱图对照组色谱图FDP组色谱图

添加标题

Crp

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Crp

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Crp

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ATP

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ATP

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