原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
小分子BNS-22的靶标确证——Westernblot药学12210121416沈鹏
目录1.参考文献2.小分子及靶标3.靶标的预测和确证4.Westernblot确证
文献检索步骤文摘数据库SciFinder全文数据库ScienceDirect谷粉学术筛选关键词：Smallmolecule，identification
参考文献Author：MakotoKawatani,HiroshiTakayama,MakotoMuroi,ShinyaKimura,TairaMaekawa,andHiroyukiOsada.Title：IdentificationofaSmall-MoleculeInhibitorofDNATopoisomeraseIIbyProteomicProfilingVolume：2011(18),743–751.Journal：ChemistryBiology
JCR影响因子SCI期刊分区ChemistryBiology
小分子——BNS-22BNS-22是天然植物产物GUT-70的化学合成衍生物BNS-22对癌细胞具有抗增殖的作用BNS-22是DNA拓扑异构酶II的催化抑制剂
靶标——DNA拓扑异构酶II生物学功能：催化DNA在双螺旋基础上更高层次的紧张状态与松弛状态，即超螺旋状态与解旋状态之间相互转换。TOP2能将DNA的一个双螺旋结构切开，并让另一个螺旋从缺口处穿过，之后一个双螺旋便被打开。DNA拓扑异构酶II(DNAtopoisomeraseII,TOP2)哺乳动物的TOP2有α和β两种亚型。
TOP2的靶向抑制剂可以根据机制分为两类：TOP2毒性抑制剂和TOP2催化抑制剂。TOP2毒性抑制剂能稳定TOP2-DNA复合物（即断裂复合物）的可逆性共价键，增加DNA双链断裂的发生，导致癌细胞的死亡。TOP2催化抑制剂在没有形成断裂复合物或DNA断裂的前提下，阻碍了酶的催化中心，使酶不能结合到DNA上，导致癌细胞的死亡。同时，TOP2催化抑制剂拮抗TOP2毒性抑制剂产生的DNA损伤。
通过2D-DIGE预测靶标HeLacellsweretreatedwith10uMBNS-22for18hr,andtheresultingcelllysatesweresubjectedto2D-DIGE.Thegelimageswerelinkedtoourdatabase,whichcontainedimagesthatweregeneratedby42well-characterizedsmallmolecules.The296spotsthatmatchedonallgelimageswerequantifiedusingthe2D-DIGEsystemsoftware.Then,hierarchicalclusteranalysiswasperformed,andtheresultsweredisplayedinaheatmapandtreediagram.
确证BNS-22是TOP2的催化抑制剂1.BNS-22PerturbsMitoticSpindleFormationandInducesPolyploidyByflowcytometricanalysis,24-hrtreatmentwithBNS-22increasedtheHeLacellpopulationinG2/Mphaseinaconcentration-dependentmanner.2.BNS-22InhibitsTOP2ActivityBygelelectrophoresis,measuretheeffectofBNS-22onTOP2-mediatedkinetoplastDNAdecatenation.3.BNS-22actsasaTOP2catalyticinhibitorByWesternblot,BNS-22antagonizesTOP2poison-mediatedDNAdamage.4.BNS-22bindsdirectlytoTOP2Byaffinityprecipitationassay,purifiedhumanTOP2acoprecipitatedwithBNS-22beads.
文档评论（0）