微生物数量测定.docx

《环境微生物新技术》课程作业

２、微生物数量测定方法有哪些?空气、水、土壤样品分别适用哪些方法?请举例说明。

常见微生物数量得测定方法

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计数器测定法：

即用血细胞计数器进行计数。取一定体积得样品细胞悬液置于血细胞计数器得计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室得容积就就是一定得（O、1mm3),因而根据计数器刻度内得细菌数,可计算样品中得含菌数。本法简便易行，可立即得出结果。?

本法不仅适于细菌计数,也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。

电子计数器计数法：

电子计数器得工作原理就就是测定小孔中液体得电阻变化,小孔仅能通过一个细胞,当一个细胞通过这个小孔时,电阻明显增加,形成一个脉冲,自动记录在电子记录装置上。?

该法测定结果较准确,但她只识别颗粒大小,而不能区分就就是否为细菌。因此,要求菌悬液中不含任何碎片。

3、活细胞计数法?:

常用得有平板菌落计数法,就就是根据每个活得细菌能长出一个菌落得原理设计得。取一定容量得菌悬液,作一系列得倍比稀释,然后将定量得稀释液进行平板培养，根据培养出得菌落数,可算出活菌数。?

此法灵敏度高,就就是一种检测污染活菌数得方法,也就就是目前国际上许多国家所采用得方法。使用该法应注意：①一般选取菌落数在3０~3０0之间得平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延,影响计数，可在培养基中加入Ｏ、001%２，３,５一氯化三苯基四氮唑（TTＣ);③本法限用于形成菌落得微生物。

广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料得细菌检验，就就是最常用得活菌计数法。

4、比浊法?

比浊法就就是根据菌悬液得透光量间接地测定细菌得数量。细菌悬浮液得浓度在一定范围内与透光度成反比,与光密度成正比,所以,可用光电比色计测定菌液,用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。?此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌得悬浮液,得出相对得细菌数目，对颜色太深得样品,不能用此法测定。

5、测定细胞重量法?

此法分为湿重法和干重法。湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重;干重法系单位体积培养物经离心后,以清水洗净放人干燥器加热烘干,使之失去水分然后称重。??????

此法适于菌体浓度较高得样品,就就是测定丝状真菌生长量得一种常用方法。

6、测定细胞总氮量或总碳量?

氮、碳就就是细胞得主要成分,含量较稳定,测定氮、碳得含量可以推知细胞得质量。此法适于细胞浓度较高得样品。

7、颜色改变单位法(colｏｕｒ?ｃｈａｎge?ｕnｉt，简称CCU)?

???通常用于很小，用一般得比浊法无法计数得微生物,比如支原体等,因为支原体得液体培养物就就是完全透明得,呈现为清亮透明红色,因此无法用比浊法来计数,由于支原体固体培养很困难,用ｃfｕ法也不容易计数,因此需要用特殊得计数方法,即CCU法。她就就是以微生物在培养基中得代谢活力为指标，来计数微生物得相对含量得,下面以解脲脲原体为例单介绍其操作:

(1)取１2只无菌试管，每一管装1、８ml解脲脲原体培养基。?

(2）在第一管加入0、2ｍl待测解脲脲原体菌液,充分混匀,从中吸取0、２ml加入第二管，依次类推,10倍梯度稀释,一直到最末一管?

(3)于3７度培养,以培养基颜色改变得最末一管作为待测菌液得ＣCU，也就就就是支原体得最大代谢活力,比如第六管出现颜色改变，她得相对浓度就就就是1０得6次方CCU／mｌ、?

取一定体积得样品细胞悬液置于血细胞计数器得计数室内,用显微镜观察计数或做片在显微镜下数,均称为显微镜直接计数法。?

用琼脂平板计数,称为菌落计数法?。?

一般来说，比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌得计数,但就就是对支原体这样比较特殊得微生物，用ＣCU法比较合适。?

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微生物主要包括原核微生物、真核微生物、病毒等三大类,由于多数微生物得个体较小,肉眼无法观察,对其计数一般比较困难。在目前得微生物实验教学,对微生物计数得方法主要有三大类:总细胞计数法、活细胞计数法和微生物生长量测定法。并不就就是每一种方法都就就是通用得,不同得微生物种类需要不同得计数方法,目前多用以下8种方法进行计数:

1、总细胞计数法

1、1血细胞计数板计数法血细胞计数板就就是一块特制得载玻片，其上划有计数室,通过对计数室中得微生物数量得读取,计算原溶液中得微生物数量。此方法由于计数板较厚,且计数室得高度就就是0、1mm,不能采用油镜进行观察,故只能对体积较大得真核微生物进行测定,如酵母菌、霉菌抱子等,只能测得所有细胞得总数,不能区别死细胞和活细胞,尤其就就是对运动能力强得活细胞难以计数。

目前已经提出一些方法,如结合特定得美蓝染色技术,区别酵母菌死活细胞,将运动得细胞加人甲醛溶液