高效液相色谱法培训课件.pptVIP

高效液相色谱法;高效液相色谱法〔HPLC〕是60年代末以经典液相色谱法为根底，引入了气相色谱的理论与实验方法，流动相用高压泵输送，采用高效固定相和在线检测等手段开展而成的别离分析方法。

与气相色谱法相比具有：适用范围广，样品预处理简单，别离效率高，流动相选择范围广，检测方法多为非破坏性的，流出组分可回收等优点。;HPLC;正相色谱〔normalphase〕

流动相极性小于固定相极性的分配色谱法称为正相分配色谱。常用的分析柱有:

氨基柱、氰基柱、硅胶柱。

常用流动相为极性小的有机溶剂。

反相色谱〔reversedphase〕

流动相极性大于固定相极性的分配色谱法称为反相分配色谱法。常用的分析柱有：ODS(C18)，C8，C2。

常用流动相为甲醇-水，乙腈-水。;离子抑制色谱〔ionsuppressionchromatography〕——调节流动相的pH值，抑制组分的解离，增加组分在固定相中的溶解度，改善峰形，以到达别离有机弱酸和弱碱的目的。

离子对色谱〔ionpairchromatography〕——将反离子参加流动相中，与呈解离状态的被测物作用，生成脂溶性的中性离子对络合物，从而增加了被测物在非极性固定相中的溶解度，改善别离效果，到达别离目的。

常用反离子有：季铵盐——用于酸类

烷基磺酸盐——用于碱类;离子色谱法〔ionchromatography〕

离子色谱是由经典的离子交换色谱开展起来的一种液相色谱技术，利用物质在离子交换柱上迁移的差异而到达别离，用于亲水性阴阳离子的测定。根据是否采用抑制柱，可分为抑制型离子色谱和非抑制型离子色谱。;空间排斥色谱〔stericexclusion?〕

也称凝胶色谱，依据被别离组分分子尺寸与凝胶空径大小之间的相对关系而别离，类似于分子筛作用。在一定分子线团尺寸内，分子越大，保存时间越短。

凝胶渗透——以有机溶剂为流动相

凝胶过滤——以水溶液为流动相

对于相同化学组成的高分子化合物，其分子尺寸大小与分子量成正比，因此凝胶色谱可以研究高分子化合物的分子量分布。;胶束色谱(micellarchromatography)

外表活性剂在水中超过某一浓度〔临界浓度〕时，多余的外表活性剂不再溶解，聚集而成胶束〔胶粒〕??

以胶束分散体系为流动相的色谱法称为胶束色谱法。它的流动相为胶束多相分散体系，不是真溶液；流动相中不含有机溶剂。

因胶束色谱法的流动相是多相分散体系，在整个色谱体系中又增加了一相，故也被称为假相色谱〔pseudophasechromatography〕。;手性色谱(chiralchromatography)

用于别离手性药物对映体的一种有效技术，可分为直接法和间接法两类：

直接法

手性固定相法〔chiralstationaryphase;CSP)

手性流动相法(chiralmobilephaseadditive;CMPA)

间接法—手性试剂衍生化法chiralderivatizationreagent,CDR);;输液泵

多用柱塞往复泵，柱塞向前运动，液体输出，流向色谱柱；向后运动，将贮液瓶中液体吸入缸体。如此往复运动，将流动相源源不断地输送到色谱柱中。

柱塞往复泵属于恒流泵，流量不受柱阻影响，泵压最高为400kg/cm2。

这种泵具有清洗容易，更换流动相方便等优点，但脉动性较大是其缺点。目前多采用双泵补偿法来克服这一问题。;;防止使用对不锈钢有腐蚀性的溶剂。

例：硝酸、硫酸、盐酸、卤化物，

四氯化碳与异丙醇或四氢呋喃的混

合物，含强络合剂的溶液等。;;;;进样阀;1;注意：使用后应清洗！;进样注意点

进样阀的废液出口端高度必须与进样针在同一水平位置，以免虹吸作用，使样品向针筒方向回流，或从废液口流出。

使用前后，要用流动相〔不含酸碱等缓冲液〕或甲醇或水冲洗针孔，用针孔清洗器〕。;进样方法

整个定量圈体积进样——为获得好的精密度，进样量应大于定量圈量的2-5倍以上。由于层流影响，需要有过量的样品液来取代管壁上的流动相〔见以下图〕。;例20?l定量圈，进样体积不能超过10?l。否那么，局部样品将会从出口流失。这是因为由于层流的关系，样品流经管中心的速度是平均速度的两倍。

进样前应用流动相冲洗进样孔，以除去前一针留下的样品。注射针必须清洗干净。;检测器

紫外检测器

可变波长检测器

光电二极管阵列检测器

荧光检测器

电化学检测器

蒸发光散射

示差检测器

质谱;色谱图;蒸发光散射检测器;组分的气溶胶;质谱检测器;UV-VIS;色谱柱

色谱柱有柱管和固定相组成，柱管用不锈钢制成，柱长10～30cm，内径2～6mm，以4.6mm的内径最常用。

根据键合基团极性不同，化学键合相可分为