动物细胞培养课件课件.pptVIP

关于动物细胞培养课件第1页，共21页，星期日，2025年，2月5日壹肆叁贰目录动物细胞培养历史发展动物细胞培养简介动物细胞培养技术应用动物细胞培养问题及展望第2页，共21页，星期日，2025年，2月5日动物细胞培养历史发展第3页，共21页，星期日，2025年，2月5日1907年，哈里森（Harrison）在无菌条件下用淋巴液作培养基，培养蛙胚神经组织存活数周，并观察到神经细胞突起的生长过程，由此创建了盖片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法，奠定了动物组织体外培养的基础。之后，又有人将悬滴培养法改良为双盖片培养，提高了传代效率并减少了污染。1923年，卡雷尔（Carrel）设计了卡氏瓶培养法，扩大了组织生存空间。1951年，厄尔（Earle）发明了体外培养动物细胞的人工合成培养基。1951年，波米拉（Pomerat）设计了灌流小室，使细胞生活在不断更新的培养液中，便于作显微摄影和细胞代谢的研究。第4页，共21页，星期日，2025年，2月5日1957年，格拉夫（Graff）用灌流技术进一步提高了细胞悬浮培养的效率。1957年，杜尔贝科（Dulbecco）等人采用胰蛋白酶消化处理和应用液体培养基的方法，获得了单层细胞培养。单层培养法的出现，对组织培养的发展起了很大的推动作用。此后单层培养成为组织培养普遍应用的技术。20世纪60年代后，动物细胞大规模培养技术开始起步，并逐步发展。20世纪80年代后，随着基因工程和其他细胞工程技术的发展，细胞培养技术已成为转基因技术、生物制药及其他许多技术的基础，在现代生物技术中发挥着重要的作用。第5页，共21页，星期日，2025年，2月5日动物细胞培养简介第6页，共21页，星期日，2025年，2月5日动物细胞培养条件合适的培养基——体外细胞生长增殖的最重要的条件之一血清和血浆——提供细胞生长必须的营养成份无菌、无毒的环境——保证细胞在体外培养成功的首要条件温度（36.5±0.5）和pH（7.2—7.4）——维持培养细胞旺盛生长气体环境——维持培养细胞旺盛生长第7页，共21页，星期日，2025年，2月5日动物细胞培养基细胞培养基的种类很多按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基）按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质第8页，共21页，星期日，2025年，2月5日氨基酸：有几种氨基酸细胞无法自己合成，培养基中必须含有，培养基中必须含有大量谷氨酰胺（细胞合成核酸和蛋白质必需）碳水化合物：碳水化合物是细胞生长的主要能量来源，主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等无机盐：培养液中无机盐的主要功能是帮助细胞维持渗透压平衡。此外，通过提供钠，钾和钙离子，帮助细胞调节细胞膜功能。第9页，共21页，星期日，2025年，2月5日缓冲系统：大多数细胞所需pH?在?7.2?-?7.4。但是，细胞培养最适pH?值随培养的细胞种类不同而不同。由于多数培养液靠碳酸氢钠（NaHCO3）与CO2?体系进行缓冲，因此，气相中的CO2?浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡。维生素：在细胞培养中，尽管血清是维生素重要来源，?但是许多培养基中添加了各种维生素以适合更多的细胞系生长第10页，共21页，星期日，2025年，2月5日细胞培养方法贴壁培养悬浮培养固定化培养微载体培养中空纤维培养微囊法培养第11页，共21页，星期日，2025年，2月5日贴壁培养方法适用于贴壁依赖性细胞，即来自于实体组织的细胞悬浮培养方法适用于非贴壁依赖性细胞，如悬浮适应细胞、源于循环系统的细胞及肿瘤细胞等固定化培养对贴壁依赖性细胞和非贴壁依赖性细胞均适用，它的优点是剪切力低、传递效果好、抗污染能力强、细胞生长密度高、产物易于收集、分离和纯化第12页，共21页，星期日，2025年，2月5日微载体培养系统由VanWezel于1972年首先提出，使贴壁依赖型细胞贴附在微载体上悬浮于液体培养基中生长,兼具平板培养和悬浮培养的优势,增加培养面积同时获得均一的环境培养条件(温度、pH值、CO2浓度、葡萄糖浓度等),便于控制放大获得高密度培养细胞和优化下游控制中空纤维培养技术于1972年由RichardKnazek首次报道，该技术是模拟细胞在体内生长的三维状态，利用一种人工的“毛细管”即中空纤维给培养的细胞提供物质代谢条件而建立起来的一种体外培养系统，其优点是细胞培养环境温和，培养细胞密度较高，产品较容易分离纯化第13页，共21页，星期日，2025年，2月5日细胞培养基本过程取动物胚胎或幼龄动