新解读《GB_T 40225 - 2021肌动蛋白抗体的检测 免疫印迹法》最新解读.pptxVIP

《GB/T40225-2021肌动蛋白抗体的检测免疫印迹法》

最新解读

一、GB/T40225-2021标准的核心要点速览

（一）标准适用范围深度剖析

该标准明确适用于基于免疫印迹法原理的肌动蛋白抗体测定。这意味着在涉及到通过免疫印迹技术来检测肌动蛋白抗体的实验、检测流程等，都需要遵循此标准规范。其涵盖范围不仅包括科研实验室中对肌动蛋白抗体的研究性检测，还涉及到临床诊断等实际应用场景中利用免疫印迹法的检测操作。例如，在医院临床实验室为诊断自身免疫性肝炎等疾病而进行的肌动蛋白抗体检测，就必须严格按照此标准来执行，以确保检测结果的准确性与可靠性，为疾病诊断提供坚实依据。;

（二）标准关键意义阐述

GB/T40225-2021的发布与实施，对相关领域有着至关重要的意义。从科研角度，它为肌动蛋白抗体检测的实验操作提供了统一规范，使得不同实验室间的检测结果具备可比性。在研究细胞骨架调控机制等科研项目中，不同团队依据该标准进行肌动蛋白抗体检测，得到的数据能够相互印证与整合，推动科研进程。在临床方面，

为自身免疫性疾病等的诊断提供了标准化检测方法，提高诊断的准确性与一致性。如在自身免疫性肝炎的诊断中，依照标准检测肌动蛋白抗体，能更精准判断病情，指导后续治疗方案的制定。

二、免疫印迹法原理新探

（一）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳原理新解;

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳是免疫印迹法的关键起始步

骤。其原理基于蛋白质在SDS（十二烷基硫酸钠）作用下，被带上大量负电荷，且电荷密度基本一致，从而消除了蛋白质本身电荷差异对电泳迁移率的影响。此时，

蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率主要取决于其分子质量大小。在GB/T40225-2021标准中，针对肌动蛋白分子质量为45ku±3ku的特性，规定可选择8%-12%浓度的分离胶。例如，当使用12%分离胶时，在合适的电泳条件下，不同分子质量的蛋白质在凝胶中形成不同条带，肌动蛋白也会在相应位置呈现出清晰条带，实现与其他蛋白质的有效分离，为后续检测奠定基础。

这一过程如同在分子层面搭建了???个“赛道”，让不同分子质量的蛋白质在其中“赛跑”，依据其分子质量大小有序排列。;

（二）蛋白质的印迹原理与创新

蛋白质的印迹是将经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后的蛋白质转移至固相载体（如硝酸纤维膜或PVDF膜）上。其原理是利用电流作用，在电场驱动下，蛋白质从凝胶向固相载体转移，从而在固相载体上形成与凝胶中蛋白质分布一致的“印迹”。在该标准下，转膜过程有着严格要求，如转膜缓冲液需4℃冰箱预冷30min，转膜时需在特定电流（180mA恒流）或电压（90V恒压）

条件下进行1.5h等。近年来，一些创新技术如半干转膜技术逐渐兴起，相较于传统湿转膜，其具有转膜时间短、效率高的优势，未来有望在符合标准规范的前提下，进一步优化蛋白质的印迹过程，提高检测效率与效果。

（三）检测原理的拓展与未来趋势;

检测过程通过特异性抗体作为探针，对靶抗原蛋白质进

行检测。一抗与肌动蛋白抗体特异性结合，二抗（如

HRP标记的二抗）再与一抗结合，通过二抗上的标记物（如HRP可催化底物产生化学发光信号）来检测目的条带。随着技术发展，未来可能会出现更高灵敏度与特异性的检测抗体，如基于纳米技术的抗体标记物，能够更精准地检测到极微量的肌动蛋白抗体，拓展检测范围，提高检测下限，为早期疾病诊断等提供更有力支持。

三、实验样本处理关键要点

（一）细胞样本收集的精准操作

在细胞样本收集环节，当细胞到达处理时间或者细胞密度达到80%-95%时进行收集。从二氧化碳培养箱中取出细胞培养瓶后，要迅速置于冰上，这是为了降低细胞;

代谢活动，防止蛋白质降解等情况发生。使用移液器吸

出培养液后，用4℃冰箱预冷30min后的1×PBS缓慢平动培养瓶，充分洗涤细胞表面2-3次，以洗去残留培养基。在最后一次洗涤后，需尽可能吸干残留缓冲液，

因为残留培养基中的杂质可能会干扰后续实验结果。例如，残留的血清蛋白可能在电泳过程中形成杂带，影响对肌动蛋白条带的判断。整个操作过程要注意无菌操作，避免微生物污染，确保样本的纯净性与完整性。

（二）细胞裂解的优化策略

向培养瓶中加入4℃冰箱预冷30min后的NP-40裂解液（每75cm2培养瓶约加1mL），放置在冰上裂解20min，使细胞充分裂解，释放出细胞