临床检验苛养菌分离培养鉴定及药敏实验.docxVIP

临床少见苛养菌的分离培养鉴定及药敏实验

一、苛养菌的定义

·一大类

·对生长环境、营养要求较苛刻

·普通环境中不能或难以生长

·体外培养需添加特殊因子或其他营养成分

Challenges

Challenges

Growthofbacteriahavingdifferenphysicochemicalproperties

Overgrowth

Fastidiousbacterialspecies

Answers

Answers

VariousTemperature

Atmosphere(aerobe,anacrobeincludinganaerobecabinet,Microaerophile)

Antibiotics

Filtration

Killthewinner

Phages

Thermicshock

Pre-incubationinbloodculturebottle,Rumenfluid

嗜血杆菌属

鲍特菌属

肺炎链球菌卡他莫拉菌

弯曲菌属

·常见苛养菌幽门螺杆菌

·常见苛养菌

脑膜炎奈瑟氏菌

艰难梭菌

各种厌氧菌分支杆菌属

二、苛养菌生活条件

口普通菌环境与温度口苛养菌特殊要求

温度要求低：37℃恒温培养环境要求低：需氧条件或+10%CO2

培养时间短：18-24h易保存

温度要求高：28℃,42℃微需氧或严格厌氧

培养时间长：5-7天，甚至可达一个月

普通条件下保存存活率低

·营养要求

口普通细菌

普通血平板生长良好普通筛选平板即可：

√巧克力平板

√XLD平板

√麦康凯平板

√中国蓝平板等等

口苛养菌

因子：V因子，X因子

碳粉琼脂

各种选择性生长因子

各种抗生素：抑制杂菌

各种筛选平板

苛养菌的神秘面纱.

三、苛养菌不苛养

●临床是否有需求，细菌室亟待开展吗

了解临床需

●标本的采集与运送，方法对了吗

加强临床沟通

●苛养“君”要的条件满足了吗

苛养君条件

标本采集至关重要：加强临床沟通

平板选择的重要性

四、鲍特菌属

1、百日咳

由百日咳鲍特菌引起的严重急性呼吸道传染病主要通过飞沫传播

主要为5岁以下婴幼儿，尤其新生儿

百日咳的发病率和病死率均较高

√WHO估计，每年1600万百日咳患者√95%在发展中国家

√其中有19.5万例死亡

是一种疫苗可预防性疾病

百日咳疫苗

百白破疫苗：全细胞疫苗-无细胞疫苗我国现行计划免疫策略

√3、4、5月，18-24月加强一针

√未免疫人群

孕妇接种可有效保护未免疫婴幼儿

计划免疫策略更改：

A.WHO:高危地区首次DTP接种年龄可提前至6-8

周

B.美国CDC:推荐DTP免疫起始年龄为2月龄

C.我国：尚需进一步的研究

加强免疫方案：

√DTP的免疫保护力仅能维持4-12年

√失去免疫保护的青少年和成人成为婴儿百日咳潜在的传染源

√2014年ACIP推荐：密切接触1岁以下婴儿的人群在接触前2周实施预防接种

√我国尚没有针对加强免疫方案

2、博特菌属

8个种：

·百日咳博特菌：百日咳

·副百日咳博特菌：类百日咳

·霍氏博特菌：

·禽类博特菌

少见·支气管炎博特菌

少见

·欣氏博特菌

·派氏博特菌

·特曼博特菌

表达多种毒力因子

·百日咳毒素(PT)

·状血细胞凝集素(FHA)

·百日咳黏附素·菌毛

·腺苷酸环化酶溶血素

·脂多糖(LPS)

疫苗相关成分

3、百日咳鲍特菌

·培养特性●菌落和生物学特征

卵圆形短小杆菌，无鞭毛、芽胞革兰染色阴性

37℃,专性需氧

生长缓慢，需延长至5天初次分离培养营养要求高需用碳琼脂培养基

菌落：细小、圆形、光滑、凸起、灰白色不透明菌落

生化反应弱

√不发酵糖类

√过氧化氢酶(+)触酶(+)√吲哚-枸橼酸盐-脲酶-

4、百日咳鲍特菌分离培养与鉴定

1)培养基的制备

·25.5g培养基干粉(CMO119)溶于500ml蒸馏水，

121℃作用15分钟，凉至50℃,加入50ml脱纤维羊血。

·取一支附加试剂(SRO082,每支含头孢氨苄

20.0mg)溶于2ml蒸馏水，溶解后，加入上述备用培养基，混匀后倾注无菌平皿(9cm平皿，厚度

4mm)

·4-8℃冰箱密封保存

碳琼脂培养基(Code:CM0119)

组分

克/升(gm/litre)

Lab-Lemcopowder(牛肉浸粉)

10

蛋白胨

10

淀粉

10

细菌学木炭

4

氯化钠

5

烟酸

0.001

琼脂粉

12

pH7.4±0.