哺乳动物胚胎干细胞技术.pptVIP

6.可用于研究细胞癌变机理和新药物的筛选细胞癌变主要是由于正常的细胞周期发生紊乱，细胞无序增殖所致。ES细胞在正常的培养环境中能维持稳定的核型，是研究致癌物质诱发细胞癌变机理的理想材料；在研究新药过程中，需要对药物的作用机理和药效进行研究，ES细胞在体外能分化多种体细胞，可以直接作为实验材料来筛选新药，可缩短新药开发周期，且治疗的针对性强。第29页，共69页，星期日，2025年，2月5日三、胚胎干细胞研究的历史与进展干细胞研究成为继人类基因组大规模测序之后最具活力、最有影响和最有应用前景的生命科学科研究领域；1999年干细胞研究被美国《SCIENCE》杂志评为1999年度世界十大科学之冠；2000年干细胞研究再次被《SCIENCE》杂志评为该年度世界十大科学成就之一。第30页，共69页，星期日，2025年，2月5日1981年英国剑桥大学的Evans和Kaufman用延缓着床的胚泡的胚胎内细胞团ICM（innercellsmass)获得鼠的ES细胞；同年美国的Maryin用条件培养基获得鼠的ES细胞。Roberston用不同品系的鼠胚和具有不同遗传疾病的胚胎建立了细胞系并进行了多能性和嵌合特性的分析。第31页，共69页，星期日，2025年，2月5日1998年11月，美国威斯康星大学的科学家JamesThomson等从人囊胚的内层细胞团中取得胚胎干细胞。他们把胚胎干细胞与小鼠的骨髓间质细胞进行了共培养。结果表明胚胎干细胞可以进行长达5个月的非分化增殖，同时还保持着分化为滋养层组织及三种胚层组织的能力。这为胚胎干细胞的临床应用奠定了基础。第32页，共69页，星期日，2025年，2月5日1999年12月，美国科学家在《美国科学院院刊》报告说，小鼠肌肉组织的成体干细胞可以“横向分化”为血液细胞。随后，世界各国的科学家相继证实，成体干细胞包括人类的成体干细胞具有可塑性。2000年5月，日本启动“千年世纪工程”，以干细胞工程为核心技术的再生医疗成为这项工程的四大重点之一，第一年度投资金额达108亿日元。第33页，共69页，星期日，2025年，2月5日2001年1月，英国议会上院通过法案，允许科学家克隆人类早期胚胎，并利用它进行医疗研究。2001年4月，美国科学家发现，从病人臀部和大腿处抽取的脂肪中，含有大量类似干细胞的细胞，这些细胞可以发育成健康的软骨和肌肉等。第34页，共69页，星期日，2025年，2月5日2003年，美国卫生独立研究院（NationalInstitutesofHealth，NIH）华裔科学家施松涛等人首次发现牙齿间质存在干细胞。2005年报出干细胞研究领域乃至全球学术界一大学术丑闻：2004及2005年韩国汉城大学教授黄禹锡有关干细胞研究的论文两次荣登Science杂志，结果经各方查证证实其论文数据存在造假现象，2006年Science杂志宣布撤回这两篇论文。第35页，共69页，星期日，2025年，2月5日2006年，日本科学家山中亚弥等成功诱导出鼠诱导性多能干细胞（inducedPluripotentStemCell，iPS细胞），此项研究成功将干细胞研究扩充到一个新的领域：重编程！2007年，iPS研究取得巨大进展：山中亚弥等人和汤姆森带领下的华裔科学家俞君英等人分别在Cell及Science发表论文宣布成功利用人类上皮细胞诱导出iPS细胞。第36页，共69页，星期日，2025年，2月5日2008年，美国科学家解析了microRNAs在干细胞发育及分化中的调控作用，为干细胞日后的研究提供了非常重要的参考资料。2009年3月，美国白头研究所（WhiteheadInstitute）科学家在成功诱导iPS细胞后，巧妙的将诱导iPS时带入细胞的基因去除，大大降低了细胞癌变风险。2009年3月，汤姆森和俞君英带领的研究小组在iPS研究方面又迈进一大步，他们利用质粒作为诱导iPS基因的载体进行诱导iPS细胞后，随着细胞分裂丢失质粒，可以得到纯净无外源DNA的iPS细胞，在iPS细胞应用安全性方面又进一步。第37页，共69页，星期日，2025年，2月5日四.胚胎干细胞的分离培养基本程序1.胚胎干细胞的分离目前ES细胞主要有两个来源，即胚泡内细胞团和生殖嵴中的原始生殖细胞，前者更为常用。囊胚：尽量选择体内受精的胚胎分离ES细胞；对于相同来源的胚胎选择色泽透亮，ICM明显的胚胎。胎儿性腺脊：经酶消化后，可直接培养在分化抑制培养体系中，一般7d传代一次，直至出现细胞形态均一的克隆细胞团，挑选后进行扩大培养。第38页，共69页，星期日，2025年，2月5日小鼠