外源基因的表达.ppt

D）整合型异源蛋白将要表达的外源基因整合到染色体的非必需编码区上，使之成为染色体结构的一部分而稳定地遗传，以此种方式表达的外源蛋白即为整合型外源蛋白。外源基因与宿主染色体整合是根据DNA同源交换的原理第62页，共77页，星期日，2025年，2月5日E）分泌型蛋白将分泌型蛋白的信号肽编码序列与外源基因拼接，使异源蛋白表达后分泌到细胞周质中或直接进入到培养基中。优点：增大表达蛋白的稳定性，简化后续的分离纯化步骤第63页，共77页，星期日，2025年，2月5日3.1.1大肠杆菌基因表达载体3.1.2宿主菌3.1.3常见的大肠杆菌表达系统3.1.4外源基因在大肠杆菌表达的形式3.1.5外源基因的高效表达策略第64页，共77页，星期日，2025年，2月5日3.1.5外源基因的高效表达策略优化表达载体：高效启动子提高稀有密码子tRNA的表达提高mRNA稳定性提高外源基因表达产物的稳定性优化发酵过程第65页，共77页，星期日，2025年，2月5日3外源基因表达系统基因表达系统原核生物基因表达系统：大肠杆菌表达系统芽孢杆菌表达系统链霉菌表达系统蓝藻表达系统等。真核生物基因表达系统：酵母表达系统植物细胞表达系统昆虫细胞表达系统哺乳动物细胞表达系统等。第66页，共77页，星期日，2025年，2月5日色氨酸浓度高时色氨酸浓度低时第30页，共77页，星期日，2025年，2月5日2.5绝缘子绝缘子（insulator）：既是基因表达的调控元件，也是一种边界元件；它能阻止邻近的调控元件对其所界定基因的启动子起增强或抑制作用；第31页，共77页，星期日，2025年，2月5日2.6反义子反义RNA（antisenceRNA）：同某种天然mRNA反向互补的RNA分子称为反义RNA。反义子：编码反义RNA的DNA称为反义子。反义子在DNA的复制、转录和翻译三个水平对基因的表达起调节作用，其中以对蛋白质合成的抑制最为普遍。第32页，共77页，星期日，2025年，2月5日反义RNA作为调节物质的作用机制：与mRNA上核糖体结合位点结合，使得翻译不能起始；与mRNA形成双螺旋结构，作为内切酶底物；与转录产物结合，使转录提前终止。第33页，共77页，星期日，2025年，2月5日1基因表达的机制

2基因表达的调控元件

3外源基因表达系统

4基因表达产物的检测和分离纯化第六章外源基因的表达第34页，共77页，星期日，2025年，2月5日3外源基因表达系统外源基因表达系统：泛指目的基因与表达载体重组后，导入合适的受体细胞，并能在其中有效表达，产生目的基因产物（目的蛋白）。外源基因表达系统基因表达载体受体细胞基因表达系统原核生物基因表达系统：如大肠杆菌表达系统、芽孢杆菌表达系统、链霉菌表达系统、蓝藻表达系统等。真核生物基因表达系统：如酵母表达系统、植物细胞表达系统、昆虫细胞表达系统、哺乳动物细胞表达系统等。第35页，共77页，星期日，2025年，2月5日3.1大肠杆菌基因表达系统大肠杆菌——革兰氏阴性细菌；目前应用最广泛的基因表达系统。大肠杆菌表达系统的优越性：①掌握了大肠杆菌基础生物学、遗传学以及分子生物学等方面的背景知识，特别是对其基因表达调控的分子机理有深刻了解；②大肠杆菌已被发展成为一种安全的基因工程实验体系，拥有各类适用的寄主菌株和不同类型的载体系列；③实验已经证明，许多克隆的真核基因，都可以在大肠杆菌细胞中实现有效的、高水平的表达；④大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，易于进行工业化批量生产。第36页，共77页，星期日，2025年，2月5日3.1.1大肠杆菌基因表达载体3.1.2宿主菌3.1.3常见的大肠杆菌表达系统3.1.4外源基因在大肠杆菌表达的形式3.1.5外源基因的高效表达策略第37页，共77页，星期日，2025年，2月5日3.1.1大肠杆菌基因表达载体第38页，共77页，星期日，2025年，2月5日大肠杆菌基因表达载体可分为3个系统：DNA复制及重组载体的选择系统外源目的基因的转录系统蛋白质的翻译系统第39页，共77页，星期日，2025年，2月5日（1）DNA复制及重组载体的选择系统复制子常见的复制子pMB1、p15A、ColE1:松弛复制型，每细胞质粒拷贝数10～20个。pSC101:严谨复制型，每细胞质粒拷贝数少于5个。第40页，共77页，星期日，2025年，2月5日选择标记绝大多数的