TCVMA《本尼登虫病诊断技术规范》.pdf

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团体标准

T/CVMAXXX—XXXX

本尼登虫病诊断技术规范

TechnicalSpecificationforNeobenedeniamellenillness

征求意见稿

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

中国兽医协会发布

T/CVMAXXXXX—XXXX

本尼登虫病诊断技术规范

1范围

本文件规定了本尼登虫病临床检查、样品采集与病原鉴定等诊断技术要求。

本文件适用于本尼登虫病的检疫和诊断。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则

GB/T6682分析实验室用水和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语简介

下列缩略语适用于本文件

荧光PCR:实时荧光聚合酶链式反应

Ct:扩增循环次数

5流行病学

本尼登虫病由本尼登虫寄生所引起，主要危害海水养殖鱼类。该病全年均可发生，主要流行季节为

春末、夏初和秋季。

6临床检查

6.1临床特征

6.1.1患病部位

本尼登虫主要寄生于鱼的体表以及眼睛等部位，通常以宿主鱼的黏液和上皮组织为食，在鱼体上通

过前后吸盘爬行运动。

6.1.2病变

1

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寄生数量多时，患病鱼体表可见乳白色半透明的椭圆形虫体；病鱼狂躁不安，游泳异常，常常向网

箱等养殖设施摩擦身体；体表黏液增多，鱼鳞脱落，体表受伤，易引起继发性感染。

6.2初步判定

6.2.1将患病鱼捞起置于盛有淡水的容器中，如能观察到椭圆形的虫体从鱼体表脱落，可做出初步判

定。

6.2.2当发现可疑病鱼时，需继续观察或采样进行病原学鉴定。

7采样

7.1对象

患病鱼应符合5的临床症状。

7.2器官或组织

对鱼的体表黏液进行采集。

8病原学鉴定

8.1设备、器械与试剂

8.1.1设备与器械

荧光PCR检测仪、离心机、微量移液器、棉拭子、ep管等。

8.1.2试剂

8.1.2.1水生动物病原体基因组提取试剂盒

8.1.2.2本尼登虫检测引物和荧光探针，序列如下：

上游引物：5’-AGAGTGCTGCAAAACGTGATATTT-3’

下游引物：5’-GACATGTGCGTTCAAGATTTCG-3’

荧光探针：5’-FAM-TGCGAATTGCACACTGCTTCGAACA-BHQ1-3’

8.1.2.3荧光PCR反应液：

应按照不同的实时荧光PCR平台的说明书选取推荐的实时荧光PCR扩增试剂，除另有规定外，所用

生化试剂均为分析纯，试验用水符合GB/T6682的要求。

8.1.2.4阳性对照

包含本尼登虫特异性片段（附录A）的合成质粒。

8.1.2.5阴性对照

已被确认为本尼登虫病阴性的样品。

8.1.3荧光PCR操作程序

8.1.3.1样品DNA提取

2

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在核酸提取区进行。取鱼的体表黏液放至ep管，使用商品化的水生动