分解纤维素的菌的分离与提纯.pptVIP

关于分解纤维素的菌的分离与提纯第1页，共15页，星期日，2025年，2月5日目的意义实验用品实验方法与流程实验结果分析与讨论致谢第2页，共15页，星期日，2025年，2月5日目的意义能源危机、环境污染日益严重，在迈入21世纪今天，已成为人类面临的两大难题。寻找新能源，减少环境污染，越来越显得重要。纤维素是植物光合作用的主要产物，利用微生物可将纤维材料转化为能源、饲料、化工等原料。筛选出降解纤维素的菌株有助于投入生产，在能源、工业生产等作为理论参考。第3页，共15页，星期日，2025年，2月5日实验用品培养基：羧甲基纤维素钠培养基（初筛培养基）：CMC-Na3.0g(NH4)2SO42.0gK2HPO41.0gMgSO4﹒7H2O0.5g胰蛋白胨1.0g琼脂20g刚果红培养基（复筛培养基）：CMC-Na3.0g(NH4)2SO42.0gK2HPO41.0gMgSO4﹒7H2O0.5g胰蛋白胨1.0g琼脂20g刚果红0.0692g水1000mlPH7.0发酵产酶培养基：CMC-Na10.0g(NH4)2SO44.0gKH2PO42.0MgSO4.7H2O0.5gH2O1000mlPH6.0主要仪器：紫外分光光度计UV-2550型高速离心机HC-2518型主要试剂：3,5-二硝基水杨酸羧甲基纤维素钠第4页，共15页，星期日，2025年，2月5日实验方法与流程样品采集初筛复筛酶活力测定取文汇山落叶覆盖下的腐殖土、延河河泥将土样按浓度梯度配置成菌悬液，取1ml涂布到以羧甲基纤维素钠为唯一碳源的平板上，与培养箱中培养，多次平板划线分离纯化得到纯菌株。将初筛得到的菌株点样于刚果红培养基上进行复筛，,培养2d。采用十字交叉取平均值法，测量降解圈及菌落直径R1，R2。根据R1/R2的值，筛选出比值最大的几株菌。还原糖测定为DNS试剂法540nm处有最大吸光值，在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强弱成比例关系。根据产生葡萄糖的量间接作为酶活力衡量标准。第5页，共15页，星期日，2025年，2月5日标准曲线的绘制配置1mg/mL的葡萄糖标准液，取9只具塞试管，分别编号0、1、2、3、4、5、6、7、8，按下表加量：项目012345678葡萄糖标准液/ml00.20.40.60.81.01.21.41.6相当于葡萄糖量/mg00.20.40.60.81.01.21.41.6蒸馏水/ml2.01.81.61.41.21.00.80.60.4DNS试剂/ml1.51.51.51.51.51.51.51.51.5酶活力测定具体步骤:粗酶液的提取取10mL试管，加入6mL1.0%羧甲基纤维素钠溶液，再加入不同菌株提取的粗酶液，50℃水浴中酶解30min，加2.0mLDNS溶液，沸水浴8min，取出于冷水中冷却至室温，定容10.0mL，在540nm下测吸光值混匀后，放入沸水中，准确沸水浴8分钟，取出冷却至室温，加入21.5ml蒸馏水，以0号为对照在540nm下测定其OD值，绘制葡萄糖标准曲线用接种环从试管里取一环活化后的菌株，加入到产酶发酵培养基上培养，每隔一天取一定培养液，离心（8000r/min,10min）取上清液，即为粗酶液。第6页，共15页，星期日，2025年，2月5日实验结果经过多次分离纯化，共分离出9株菌；接种到刚果红培养基上筛选名称ML-1SX-2WZ-3WX-4WD-5LT-6LH-7BF-8ZP-9降解圈直径R1(cm)1.61.21.451.52.11.351.351.651.55菌落直径R2(cm)0.350.40.360.350.30.320.320.320.42R1/R24.573.004.034.277.004.224.225.163.69十字交叉法测得菌落及降解圈的直径如下表：由表中数据，挑选出ML-1，WD-5,BF-8R1/R2比值最大的三株菌第7页，共15页，星期日，2025年，2月5日对所筛出的三株菌进行镜检得到图片如下：ML-1WD-5BF-8ML-1WD-5BF-8革兰氏染色结果阴性（红色)阳性(蓝紫色)阴性(红色)细菌