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免疫组织化学（IHC），是应用抗原与抗体特异性结合的原理，通过酶标抗体与底物反应显色，从而对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量的研究。
免疫组化实验避坑攻略
操作要点、结果判读及疑难解析
李天月IHC资深实验专家
北京义翘神州科技股份有限公司
1IHC技术原理与流程
2IHC染色结果分析
CONTENT
3IHC常见问题及解决方法
4精品IHC抗体及定制服务
义翘神州
01
IHC技术原理与流程
义翘神州
IHC技术原理
免疫组织化学（IHC），是应用抗原与抗体特异性结合的原理，通过酶标抗体与底物反应显色，
从而对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量的研究。
义翘神州
IHC技术流程
样本切片制备
12345
组织取样固定脱水包埋切片
切片免疫染色
底物
1211109876
有色
产物
显色二抗孵育一抗孵育封闭抗原修复灭活过氧化物酶脱蜡水化
Conjugated
CellAntigenPrimarySecondary
Antibody
Antibody
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IHC实验操作关键点小结
样本处理抗体选择与孵育显色与检测
•组织固定•一抗选择与优化•显色系统
关键点：使用10%中性缓冲甲醛抗体浓度：通过预实验确定最佳•HRP-DAB：棕色沉淀，需控
（pH7.4），固定24-48h，抗原修复稀释比（常用范围1:50-阻断内源性酶活性制显色时间（通常3分钟），
避免过度固定导致抗原表位破1:500）。
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