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生物细胞工程核心技术图解
演讲人：
日期:
目录
02
核心操作技术体系
01
细胞工程基础理论
03
典型应用场景解析
04
关键设备与材料
05
质量控制标准
06
前沿发展方向
01
PART
细胞工程基础理论
细胞全能性原理
已分化的植物细胞仍然具有形成完整植株的潜能。
细胞具有全能性
利用细胞全能性原理，通过无菌操作将植物组织或细胞放置在人工培养基上进行培养。
植物组织培养技术
如快速繁殖、遗传改良、种质保存等方面。
细胞全能性应用
细胞分化调控机制
调控机制
包括基因调控、表观遗传修饰、细胞间相互作用等，共同控制细胞分化方向和程度。
03
细胞分化是基因选择性表达的结果，不同细胞中表达的基因有所不同。
02
基因选择性表达
细胞分化
在个体发育过程中，细胞逐渐产生形态、结构和功能上的差异。
01
生物反应器作用原理
指利用生物体系（如微生物、动物细胞、植物细胞等）进行生物转化或生物合成的装置。
生物反应器定义
生物反应器类型
作用原理
根据反应类型可分为发酵罐、细胞培养反应器、酶反应器等。
通过优化反应条件（如温度、pH、营养物质等），提高生物催化剂（如酶、细胞）的催化效率，从而实现高效生物转化或生物合成。
02
PART
核心操作技术体系
基础培养基添加血清、生长因子、激素等。
培养基选择与制备
酶消化法、机械分离法、自然脱落法等。
细胞传代方法
01
02
03
04
无菌、适宜温度、气体环境（氧气、二氧化碳）、pH等。
基本培养条件
细胞形态、生长曲线、克隆形成率等。
细胞活力检测
细胞培养与传代技术
基因编辑工具应用
基因编辑原理
CRISPR-Cas9、TALEN、ZFN等。
基因编辑步骤
设计sgRNA、构建编辑载体、细胞转染、筛选编辑细胞等。
基因编辑效率检测
PCR、测序、T7E1酶切等。
基因编辑应用
基因敲除、基因突变、基因插入等。
细胞融合与筛选技术
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化学融合法（PEG、电融合）、生物融合法（病毒介导）。
细胞融合方法
细胞生长特性、形态结构、染色体分析等。
杂交细胞特性鉴定
形态学筛选、荧光标记筛选、抗药性筛选等。
融合细胞筛选
01
03
02
制备单克隆抗体、细胞融合疫苗、细胞治疗等。
杂交细胞应用
04
03
PART
典型应用场景解析
单克隆抗体制备流程
动物免疫
细胞融合
筛选与克隆
抗体纯化
利用特定抗原免疫小鼠、大鼠等动物，使其产生相应的B细胞。
将B细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，既具有B细胞分泌特异性抗体的能力，又具有骨髓瘤细胞无限增殖的特性。
通过特异性筛选方法，选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞，并进行克隆化培养。
利用亲和层析等技术，将杂交瘤细胞产生的抗体从细胞培养液中分离纯化出来。
干细胞获取
从脐带血、骨髓、脂肪等组织中分离出干细胞，或通过诱导多能干细胞技术获得。
干细胞培养
在特定条件下对干细胞进行培养，使其扩增并维持未分化状态。
干细胞分化
通过特定的分化条件，诱导干细胞分化为所需的细胞类型，如心肌细胞、神经细胞等。
干细胞移植
将分化后的细胞移植到患者体内，修复受损组织或器官，达到治疗效果。
干细胞治疗技术路径
人工染色体构建方案
染色体材料选择
从供体细胞中提取染色体，或通过基因工程技术构建特定的DNA片段。
染色体切割与拼接
利用限制性内切酶等技术，对染色体进行切割和拼接，以获得所需的染色体结构。
染色体复制与扩增
通过细胞培养技术，使构建的人工染色体在受体细胞中复制并扩增。
染色体导入受体细胞
通过细胞融合、显微操作等方法，将人工染色体导入受体细胞，实现遗传信息的转移和表达。
04
PART
关键设备与材料
生物安全柜操作规范
确保生物安全柜内洁净度达到规定要求，并定期检查和维护设备。
正确使用生物安全柜
在生物安全柜内处理样品时，必须佩戴适当的防护手套和口罩，避免交叉污染。
样品处理
实验完毕后，必须将废弃物放置在指定的生物安全容器内，并进行适当的消毒处理。
废弃物处理
细胞冻存技术要点
冻存前处理
在细胞冻存前，需要进行适当的处理，如细胞计数、调整细胞浓度等。
01
冷冻保护剂的选择
选择适当的冷冻保护剂可以有效提高细胞的存活率，常用的冷冻保护剂包括二甲基亚砜、血清等。
02
降温速度
控制降温速度是关键，过快的降温速度会损伤细胞，一般采用程序降温法。
03
培养基配方优化策略
添加剂的选择
在培养基中添加适当的添加剂，如血清、生长因子等，可以促进细胞的生长和增殖。
03
调整培养基的酸碱度和渗透压，使其与细胞内部环境保持一致。
02
酸碱度和渗透压
营养成分
根据细胞类型优化培养基配方，确保提供细胞所需的营养成分。
01
05
PART
质量控制标准
细胞活性检测方法
通过细胞增殖实验，测定细胞的增殖速率，反映细胞的生
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