免疫组化染色技术.pdfVIP

分［享］免疫组织化学染色技术

法医学院官大威

第一节常规组织学染色技术概述

宏观微观超微构基因水平

组织形态学研究技术的种类：

一、病理大体组织标本H勺染色措施

在标本制作中，为了某种特殊目的，突出显示标本的重要部分，借助组织切片的特殊染色措施

对■标本进行染色，将病变器官及不同样组织成分用染料染成不同样口勺颜色，以便于辨别大体

标本的不同样成分和病变特点,如：

.・脂肪组织染色法

目的:重要用于心、肝、肾脂肪变性，动脉粥样硬化大体标本的染色

试剂:苏丹in或苏丹w

成果:病变处脂肪组织呈橙黄色

..初期心肌梗死痈法

目的：显示初期心肌梗死的区域

试剂:0.1%NBT(硝基四哇蓝)/0.2mol/LPBS(pH7.6)

措施:将2-3mm厚新鲜心肌大片放入试剂中,37°C孵育20min。

成果：正常心肌呈蓝色，初期心肌梗死区、纤维结缔组织、瘢痕组织呈浅蓝色或不显色。

注意：新鲜标本，尸检心肌不超过6小时。

二、光学显微镜下的组织学染色措施

.常规HE染色(hcmloxylinndcosinstining)

.组织学特殊染色

l.Mallor.三染色、Masson三染色

2.神经纤维的镀银染色

3.其他的特殊染色，包括钙、铁、铅、铜、黑色素和脂褐素、细胞DNA和RNA的染色等

上述的多种染色措施只能在细胞水平上显示组织构H勺形态变化。

三、超微构的观测

・光线波长H勺限制，光学显微镜的辨别率极限为0.2nm

有效放大倍数最高不超过2023倍。

电镜的辨别率最佳可达0.14nm,放大倍率最高可达100万倍。

第二节免疫组织化学染色技术Immunohisiochemicatechnique

由于该技术重要是用于研究和观测细胞中的某些构或分子物质和组织细胞间的成分，因此

现又称为免疫细胞化学技术。

根据标识物日勺不同样,免疫细胞化学技术可分为：

1.免疫荧光细胞化学技术

2.免疫酶细胞化学技术

3.免疫铁蛋白技术

4.免疫金-银细胞化学技术

5.免疫电子显微镜技术

一、免疫组织化学染色措施日勺原理

.抗原a（ntigen）

1.定义：是一类在适合条件下能激发机体免疫系统发生免疫应答，并能与免疫应答产生H勺效

应物质(抗体和效应细胞)在体内或体外发生特异性结合反应的物质。抗原具有两种性能：

(1)免疫原性(immunogenicity指抗原分子具有诱导巩体产生免疫应答H勺特性。

(2反应原性(reactogenicily指抗原分子与抗体或效应T细胞等免疫应答产物发生特异

性反应的特性。

2.抗原的分完全抗原、半抗原

免疫学分

胸腺依赖抗原与非依赖抗原

外源性抗原:微生物、花粉等

内源性抗原：隐蔽H勺自身抗原、肿瘤有关抗原等

临床分同种异型抗原：人白细胞抗原、血型抗原

异嗜性抗原：人与其他动物、植物等之间存在的共同抗原

.抗体(antibody

1.定义：机体受到抗原刺激后，通过体液免疫应答，B淋巴细胞活化、增殖，分化为浆细胞，由

浆细胞合成并分泌的仅与该抗原发生特异性反应欧I球蛋白，称为抗体。

大部分抗体电泳后位于丫区带，1972年国际免疫学联合会正式将化学构造相似或相似的)「

球蛋白分子统一命名为免疫球蛋白(immunoglobin,Ig。

2.抗体的J种:五，即IgA.IgD.IgE、IgG、IgM

免疫组织化学染色技术中.使用的抗体重要是IgG,个别状况下使用IgG的亚型，多为IgGU

.免疫组织化学染色的反应原理及显色原理

1.免疫组织化学染色IJ勺反应原理

..染色反应MJ最基本原理是抗原抗体的反应。

..通过对针对标本中对应抗原的抗体上标识某种发色剂或酶，再通过激发发色剂或使用某

种显色剂，在显微镜下使标本中抗原抗体反应日勺部位产生肉眼可观测到的颜色以确