流式细胞仪免疫技术原理与应用.pptxVIP

流式细胞仪免疫技术原理与应用演讲人：2025-06-03

目录02样本制备规范01技术原理03数据分析方法04临床应用场景05设备维护要点06技术进展与挑战

01技术原理

流式细胞仪基本工作原理细胞或颗粒的悬浮液通过喷嘴散射光和荧光收集激光束照射细胞数据分析与结果呈现在高压下，细胞或颗粒以单个形式通过喷嘴。当细胞通过激光束时，会发生散射和荧光等现象。收集细胞产生的散射光和荧光信号，并进行分析。通过计算机对收集的信号进行分析，得出细胞的参数和特性，如大小、形态、内部结构等。

光学系统与荧光标记机制光源通常采用激光作为光源，激发荧光物质产生荧光。01荧光标记荧光染料与抗体结合，特异性地标记目标细胞或颗粒。02滤光片通过滤光片去除杂散光，提高荧光检测的灵敏度。03荧光检测器检测细胞发出的荧光信号，并将其转化为电信号进行分析。04

信号放大与转换数据采集与处理将微弱的荧光信号进行放大和转换，使其能够被计算机识别和处理。对放大后的信号进行采集和处理，得到细胞的各种参数和特性数据。信号检测与数据生成逻辑数据存储与传输将处理后的数据进行存储和传输，以便后续分析和应用。结果分析与报告生成根据采集的数据进行结果分析和报告生成，为科研和临床应用提供重要参考依据。

02样本制备规范

样本处理与保存条件确保采集的样本新鲜、无污染，避免细胞变形或破裂，尽量采用无菌操作。样本采集样本处理样本保存使用适当的方法将样本中的细胞分离出来，如酶解法、机械分离法等，避免细胞损伤。细胞悬液需放置于4℃冰箱中保存，如需长期保存，则需加入适当的细胞冻存液并放置于-80℃冰箱或液氮中。

抗体选择与标记策略根据待测细胞表面抗原种类和实验目的，选择特异性高、亲和力强的抗体进行标记。抗体选择抗体标记可采用直接标记或间接标记法，直接标记法适用于检测细胞表面抗原，间接标记法则可用于检测细胞内抗原或提高检测灵敏度。标记策略0102

染色步骤与质量控制01染色步骤按照抗体说明书进行染色操作，包括抗体的稀释、加入细胞悬液、孵育时间等，确保抗体与细胞表面抗原充分结合。02质量控制染色后需进行细胞洗涤和离心，以去除未结合的抗体，同时需进行对照实验，如阴性对照和阳性对照，以验证染色效果和抗体特异性。

03数据分析方法

FSC（前向散射光）SSC（侧向散射光）反映细胞大小，光信号越强，细胞越大。反映细胞内部颗粒的复杂程度，如细胞颗粒、细胞器等，光信号越强，细胞内部越复杂。基础参数解读（FSC/SSC）荧光参数通过荧光染料标记抗体与细胞表面或细胞内特定抗原结合，反映细胞特定抗原表达情况。阈值设定根据FSC、SSC和荧光参数设定阈值，区分细胞群体和背景噪音。

细胞分型与亚群分析细胞表面标志分析利用特异性抗体与细胞表面标志结合，通过荧光信号区分不同细胞类型。细胞内标志分析通过细胞通透性改变或固定破膜技术，对细胞内标志进行染色分析。亚群分析根据细胞表面标志、细胞内标志及多参数组合，对细胞进行细分，分析不同亚群比例和功能。细胞增殖分析通过标记细胞增殖相关抗原或荧光染料，分析细胞增殖周期和增殖能力。

软件工具操作流程数据预处理细胞分型与亚群分析参数设置与门控数据可视化与报告生成包括数据去噪、信号补偿、细胞筛选等步骤，提高数据质量和分析准确性。根据实验目的和细胞特性，设置FSC、SSC和荧光参数阈值，并通过门控技术排除非目标细胞群体。利用软件工具提供的图形界面和算法，对细胞进行分型和亚群分析，并计算各亚群比例和特征参数。将分析结果以图表、散点图等形式展示，生成报告或导出数据文件供后续分析使用。

04临床应用场景

免疫细胞功能评估通过流式细胞仪检测血液、组织或细胞培养中不同淋巴细胞亚群的比例和功能状态，评估免疫系统的整体反应和特定免疫细胞的功能。淋巴细胞亚群分析细胞因子和受体检测细胞毒性测定利用流式细胞仪检测细胞因子和受体表达水平，了解免疫细胞的激活状态、分化程度和功能。通过流式细胞仪检测免疫细胞对靶细胞的杀伤作用，评估免疫细胞的细胞毒性功能。

利用流式细胞仪检测白血病细胞表面标志和细胞内标志，辅助白血病的免疫分型诊断。血液疾病诊断标准白血病免疫分型通过流式细胞仪检测淋巴瘤细胞的免疫表型，辅助淋巴瘤的诊断和鉴别诊断。淋巴瘤诊断和鉴别诊断利用流式细胞仪检测骨髓细胞的免疫表型和细胞周期特征，辅助骨髓增生异常综合征的诊断。骨髓增生异常综合征的诊断

肿瘤微环境研究肿瘤细胞免疫表型分析通过流式细胞仪检测肿瘤细胞表面标志和细胞内标志，分析肿瘤细胞的免疫表型，研究肿瘤细胞的免疫逃逸机制。免疫细胞在肿瘤微环境中的功能研究细胞因子和趋化因子在肿瘤微环境中的作用研究利用流式细胞仪检测肿瘤微环境中免疫细胞的种类、数量和功能状态，研究免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤作用及其机制。通过流式细胞仪检测肿瘤微环境中细胞因子和趋化因子的表达水平，研究