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病理技术细胞涂片方法

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目录

CONTENTS

01

样本制备规范

02

涂片制作流程

03

固定处理标准

04

染色技术规范

05

质量控制体系

06

设备维护管理

01

样本制备规范

细胞采集操作要点

选择病变组织或疑似病灶，如肿瘤、溃疡、脓肿等，确保采集的细胞具有代表性。

采集部位选择

采用适当的采集工具，如刮勺、针头、吸管等，避免细胞变形或丢失。

采集方法

确保采集足够的细胞数量，以满足涂片制备和诊断需求。

采集数量

样本保存条件控制

样本容器

选择密封性好的容器，避免细胞外渗或污染。

01

保存温度

避免过高或过低的温度，以免影响细胞形态和诊断准确性。

02

保存时间

尽量缩短保存时间，避免细胞变性和自溶。

03

离心参数标准化

离心速度

根据样本类型和细胞特性，选择合适的离心速度，避免细胞破裂。

01

离心时间

控制离心时间，以获得适当的细胞沉淀，避免细胞丢失。

02

02

涂片制作流程

推片角度控制技巧

推片时，应选择适当的角度，使细胞均匀分布在载玻片上，避免细胞重叠或堆积。

推片角度选择

推片力度控制

推片方向选择

推片时，力度要适中，避免力度过大导致细胞破裂或过小导致细胞无法展开。

推片时，应沿一个方向匀速推动，避免来回推动导致细胞损伤。

细胞密度调节方法

细胞悬液浓度调节

通过调整细胞悬液的浓度，可以控制涂片中的细胞密度。浓度过高时，可适当稀释；浓度过低时，可增加细胞数量。

涂片面积控制

细胞分布均匀性调整

控制涂片的面积，可以在一定程度上调节细胞密度。涂片面积较大时，细胞密度相对较低；涂片面积较小时，细胞密度相对较高。

在涂片过程中，可以通过轻轻晃动载玻片或利用细胞悬液的表面张力，使细胞在涂片上均匀分布。

1

2

3

空气干燥时间控制

涂片制作完成后，应放置在空气中自然干燥。干燥时间不宜过长或过短，以免影响细胞形态和染色效果。

干燥时间选择

干燥时，应放置在通风、无尘的环境中，避免污染和干扰。同时，避免阳光直射或高温环境，以免细胞受热变形或损坏。

干燥环境控制

通过观察涂片表面是否出现水膜或水滴来判断干燥程度。当涂片表面完全干燥，无水滴或水膜时，即可进行下一步操作。

干燥程度判断

03

固定处理标准

固定液选择原则

固定液pH值

确保固定液的pH值在适宜范围内，以维持细胞结构的完整性。

03

根据样本类型和固定液种类选择合适的浓度，避免浓度过高或过低导致细胞变形或抗原丢失。

02

固定液浓度

固定液种类

选择适当的固定液，以确保细胞形态和抗原性得以保存。

01

固定时间与温度

01

固定时间

根据不同的样本类型和固定液种类，确定适当的固定时间，避免时间过长或过短导致细胞形态和抗原性受损。

02

固定温度

选择适当的固定温度，通常在室温或稍低的温度下进行，避免高温导致细胞变形或抗原破坏。

固定后漂洗要求

选择适当的漂洗液，以去除固定液残留，避免对细胞产生不良影响。

漂洗液选择

漂洗次数

漂洗方式

根据样本类型和固定液种类，确定适当的漂洗次数，确保彻底去除固定液残留。

选择适当的漂洗方式，如手动漂洗或自动化漂洗，避免细胞丢失或形态变形。

04

染色技术规范

常规染色步骤分解

涂片制备

将细胞悬液均匀涂布在载玻片上，制成单层细胞涂片。

固定

使用固定剂固定细胞形态，常用的固定剂有甲醇、乙醇等。

染色

根据染色需求选择合适的染料进行染色，常用的染料有苏木素、伊红等。

脱水

用不同浓度的酒精将涂片脱水，以去除多余的水分和染料。

透明

使用透明剂使细胞涂片变得透明，便于显微镜观察。

特殊染色适配场景

利用抗原与抗体特异性结合的原理，对细胞进行定位、定性、半定量分析。

免疫组化染色

检测细胞内的特定DNA或RNA序列，用于基因定位和基因表达研究。

原位杂交染色

使用特殊染料对微生物进行染色，便于鉴别和诊断感染性疾病。

微生物染色

通过化学反应显示细胞内的特定化学成分，如糖原、脂质、蛋白质等。

细胞化学染色

染色后封片标准

封片材料

封片后检查

封片方法

贴标签

选择适宜的封片胶或中性树胶进行封片，以避免细胞涂片受到空气和湿气的侵蚀。

用镊子将盖玻片轻轻放置在细胞涂片上，避免产生气泡，然后用封片胶或中性树胶沿盖玻片边缘封固。

检查封片是否严密，是否有气泡或封片胶溢出，如有，需及时重新封片。

在载玻片的适当位置贴上标签，注明细胞种类、染色方法、染色时间等信息，以便后续查找和记录。

05

质量控制体系

涂片完整性评估

细胞形态和结构

评估涂片中细胞形态是否完整，结构是否清晰，包括细胞膜、细胞核和细胞质等。

01

涂片厚度

检查涂片是否均匀，厚度是否适中，避免细胞重叠或过厚。

02

涂片范围

确保涂片范围覆盖整个玻片，避免遗漏或不足。

03

染色效果验收标准

根据细胞特性和诊断需求选择合适的染色剂。

染色剂选择