DB13T 5458-2021 重要作物病原大丽轮枝菌致病力评价技术规程.docxVIP

ICS65.020CCSB16

13

河北省地方标准

DB13/T5458—2021

重要作物病原大丽轮枝菌致病力评价

技术规程

2021-12-13发布2022-01-13实施

河北省市场监督管理局发布

DB13/T5458—2021

I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由河北省农业农村厅提出。

本文件起草单位：河北省农林科学院植物保护研究所。

本文件主要起草人：李社增、鹿秀云、杜立新、郭庆港、张晓云、赵卫松、苏振贺、马平。

DB13/T5458—2021

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重要作物病原大丽轮枝菌致病力评价

技术规程

1范围

本文件规定了重要作物病原菌大丽轮枝菌（VerticilliumdahliaeKleb.）的致病力评价方法和程序。

本文件适用于来源于不同寄主的大丽轮枝菌在棉花、茄子、马铃薯和向日葵等作物上的致病力评价。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

本文件没有规范型引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

致病力pathogenicity

是指病原菌所具有的破坏寄主和引起病变的能力。

3.2

鉴定寄主differentialhost

本文件中是指对病原菌表现感病的指定作物品种。

3.3

对照病原菌菌株referencedpathogenicisolate

在鉴定寄主上表现强致病力（病情指数≥40.0）的大丽轮枝菌菌株。

3.4

病情指数diseaseindex

全面考核鉴定寄主发病率和严重程度的综合指标。

3.5

病情指数校正系数correctioncoefficientofdiseaseindex

标准病情指数（50.0）与同批次评价试验中对照病原菌菌株在鉴定寄主上病情指数的比值，记作K。

3.6

相对病情指数relativediseaseindex

病情指数与病情指数校正系数的乘积，记作RDI。

4仪器设备

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恒温摇床、恒温培养箱、超净工作台、高压灭菌锅、冰箱、显微镜、可控温的温室及培养室（使温度保持在20℃~28℃)、不锈钢锅、电磁炉、培养皿、试管、剪子、镊子、广口瓶、酒精灯等。

5评价前准备

5.1对照病原菌菌株选择

选择对照病原菌菌株为大丽轮枝菌WX-1，落叶型，在棉花、茄子、马铃薯和向日葵四种作物的感病品种上均表现强致病力，在相应鉴定寄主上的病情指数均能稳定达到40.0以上。

5.2接种液准备

在超净工作台上，将分离纯化的大丽轮枝菌菌株及对照病原菌菌株接种在马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）平板上进行活化，25℃恒温培养7d，挑取菌落边缘的新鲜菌丝块（直径5mm）4～5块转接于马铃薯葡萄糖培养液（PDB）中，25℃、180r.min-1条件下恒温震荡培养5d，培养液用2层灭菌纱布滤除菌丝得到分生孢子悬浮液，在显微镜下用血球计数板计数滤液中分生孢子数量，并用灭菌水将其浓度调整为1.0×107孢子/mL，此为接种液。

5.3鉴定寄主选择

选择对照病原菌菌株接种后表现高度感病的棉花品种鄂荆1号、茄子品种海23号、马铃薯品种费乌瑞它和向日葵品种LD5009作为鉴定寄主。鉴定寄主种子要求在无病地繁殖。

6评价程序

6.1鉴定寄主育苗

6.1.1马铃薯育苗

将鉴定寄主种薯放置于25℃催芽15d左右，待芽长至0.5cm后，用75%酒精消毒刀具，自尾芽开始切成立体小三角块（25g～50g），保证每块至少有1～2个芽眼。25℃摊开放置4h，待薯块切口风干后开始播种于薄壁塑料育苗盆。育苗盆口径为20cm，下部垫灭菌土（大田土壤重量:育苗基质重量=1:1，121℃,0.1MPa～0.15MPa，1h）5cm～6cm，压实，每盆3块薯块，上部覆土厚度为3cm~4cm，灌足自来水，在温室中培养（培养温度为20℃~28℃,出苗后10h光照，14h黑暗。阴天开补光灯，光照过强使用遮阳网）。每个供试大丽轮枝菌菌株致病力评价试验4次重复，每5盆为1次重复。

6.1.2棉花、茄子和向日葵育苗

将各鉴定寄主的种子用1%次氯酸钠浸泡10min进行表