DB45_T1856-2018_蛤蚧及其伪品COI条形码鉴别技术规程_广西壮族自治区 conv.docxVIP

ICS65.020.30

B38 DB45广西壮族自治区地 方 标 准

DB45/T1856—2018

蛤蚧及其伪品COI条形码鉴别技术规程

IdentificationofGekkogeckoLinnaeusandAdulterantsUsingtheCOIBarcode

DB45/T1856—2018

目 次

前言................................................................................II

1 范围..............................................................................1

2 术语和定义........................................................................1

3 鉴别程序..........................................................................2

附录A（规范性附录）

附录B（规范性附录）

蛤蚧伪品........................................................3

蛤蚧及其伪品COIDNA序列........................................4

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前 言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由广西壮族自治区卫生和计划生育委员会提出。本标准由广西卫生标准化技术委员会归口。本标准起草单位：广西壮族自治区药用植物园。本标准主要起草人：徐永莉、李力、闫志刚、张月云、赵成坚、黄勇、谷颖乐。

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蛤蚧及其伪品COI条形码鉴别技术规程

1 范围

本标准规定了蛤蚧（Gekkogecko）及其伪品的COI条形码鉴别的术语和定义、鉴别程序。本标准适用于广西境内蛤蚧及其伪品COI条形码的鉴别。

2 术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

2.1

蛤蚧 Gekkogecko

蛤蚧（Gekkogecko）属爬行纲Reptilia、有鳞目Squamata、壁虎科Gekkonidae、壁虎属Gekko。蛤蚧药材为除去内脏的干燥体。包括黑点蛤蚧和红点蛤蚧。

2.2

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2.7

bp碱基对。

3 鉴别程序

3.1 鉴别条件

PCR扩增仪、核酸电泳仪和水平电泳槽、凝胶成像系统、组织基因提取试剂盒、序列比对软件。

3.2 引物序列

LCOI490：5—GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG—3。HCO2198：5—TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA—3。

3.3 DNA的提取

取药材样品，75％乙醇表面消毒，用灭菌手术刀，取样品皮下肌肉约30mg,剪碎，DNA提取研磨仪研磨2min，用组织基因提取试剂盒提取总DNA，提取步骤参见各产品使用说明书。

3.4 PCR扩增

反应体积为25μL，所加试剂包括5U/μLTaqDNA聚合酶(TaKaRa)0.5μL，10mmol/LdNTP1μL，2+

ADB45/T1856—2018A

A

附录A（规范性附录）蛤蚧伪品

无蹼壁虎Gekkoswinhonis、中国瘰螈Paramesotritonchinensis、多疣壁虎Gekkojaponicus、睑虎Goniurosauruslichtenfelderi、西藏沙蜥Phrynocephalustheobaldi、红瘰疣螈Tylototritonverrucosus、贵州疣螈Tylototritonkweichowensis、喜山岩蜥Laudakiahimalayana、变色树蜥Calotesversicolor、青海沙蜥Phrynocephalusvlangalii、山溪鲵Batrachuperuspinchonii、东方蝾螈Cynopsorientalis等。

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BB

附录B（规范性附录）

蛤蚧及其伪品COIDNA序列

B.1 蛤蚧Gekkochinensis562bp

gaattaagtcaaccaggagcactccttggaaacgaccaactatacaatgtaatcgtaacagcacacgcatttgtaataatcttcttt