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哺乳动物细胞表达技术体系
演讲人：
日期:
目录
CONTENTS
01
技术原理概述
02
表达系统构建
03
细胞培养技术
04
产物质量控制
05
工业化应用场景
06
技术挑战与对策
01
技术原理概述
哺乳动物表达系统定义
哺乳动物细胞表达系统
指利用哺乳动物细胞（如CHO、HEK293、Vero等）进行外源基因表达的一种生物技术系统。
基因转移和筛选
蛋白质翻译后加工
将外源基因通过载体（如病毒载体、质粒等）导入哺乳动物细胞，并通过筛选获得稳定表达外源基因的细胞株。
哺乳动物细胞能对外源基因进行正确的转录、翻译及翻译后加工，包括糖基化、磷酸化等，使表达产物具有生物活性。
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2
3
相对表达体系的核心优势
高效表达
哺乳动物细胞表达系统能高效表达外源基因，表达水平高且稳定。
蛋白质翻译后加工
哺乳动物细胞具有完善的蛋白质翻译后加工系统，能对外源基因表达产物进行正确的加工和修饰，使其具有天然蛋白质的生物活性。
安全性高
哺乳动物细胞表达系统具有良好的生物安全性，不会对人体产生危害，且易于大规模培养和生产。
产物稳定
哺乳动物细胞表达系统产生的外源基因表达产物稳定性好，不易被降解或失活。
生物医药领域应用价值
生物制品生产
疾病模型建立
药物靶点筛选
基因治疗
哺乳动物细胞表达系统可用于生产各种生物制品，如抗体、疫苗、基因治疗药物等。
通过哺乳动物细胞表达系统可以构建人类疾病的细胞模型，用于疾病研究、药物筛选和疗效评估等。
哺乳动物细胞表达系统可用于药物靶点筛选和验证，有助于新药研发。
哺乳动物细胞表达系统在基因治疗领域具有广泛应用前景，如基因载体、基因编辑等。
02
表达系统构建
表达载体设计原则
高效表达
载体必须含有高效启动子和增强子，以提高目的基因的表达水平。
01
稳定性
载体应稳定地存在于宿主细胞内，避免基因丢失或突变。
02
安全性
载体应不会对宿主细胞产生毒性或不良影响，且易于操作。
03
兼容性
载体应与宿主细胞的生理特性相匹配，确保基因的表达和调控。
04
宿主细胞选择标准
易于培养
宿主细胞应易于培养、扩增和转染，以满足大规模生产的需求。
表达效率高
宿主细胞应具有高效表达外源基因的能力，以提高产物的产量。
安全性高
宿主细胞应无致病性，不会对人类或环境产生危害。
易于分离纯化
宿主细胞应具有易于分离和纯化的特性，以便于产物的提取和纯化。
基因转染技术分类
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利用化学试剂将基因直接导入细胞，操作简便且转染效率高。
化学转染
利用高压电场将基因导入细胞，适用于难以转染的细胞类型。
电穿孔法
利用病毒载体将基因携带进入细胞，具有高效、稳定、长期表达的特点。
病毒转染
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将基因直接注射到细胞中，常用于转基因动物制备。
显微注射法
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03
细胞培养技术
无血清培养基开发
通过调整营养成分和比例，提高细胞在无血清培养基中的生长速度和存活率。
优化基础培养基
根据细胞类型和需求，添加必要的生长因子和激素，促进细胞增殖和分化。
添加生长因子和激素
通过优化培养条件，减少血清用量或替代血清，降低细胞培养成本。
降低培养成本
生物反应器控制参数
温度控制
精确控制生物反应器内的温度，确保细胞在适宜的环境中生长。
01
气体环境
调节生物反应器内的气体环境，如氧气、二氧化碳浓度，满足细胞生长需求。
02
搅拌和混合
通过合理的搅拌和混合方式，确保细胞在反应器内均匀分布，提高细胞利用率。
03
剪切力控制
在细胞培养过程中，控制剪切力的大小，避免对细胞造成损伤。
04
高密度培养优化策略
细胞分离与纯化
采用有效的细胞分离和纯化技术，去除杂质细胞，提高目标细胞的纯度。
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03
01
细胞培养容器改进
采用高效、易于操作、易于放大的细胞培养容器，提高细胞培养效率。
培养环境优化
通过优化培养环境，如pH值、渗透压、光照等，提高细胞密度和生长速度。
细胞诱导分化
通过特定的诱导条件，使细胞在培养过程中分化为特定的细胞类型，提高细胞的产量和功能。
04
产物质量控制
蛋白糖基化检测方法
包括高效液相色谱（HPLC）、离子交换色谱等，用于糖基化产物的分离、纯化和定量。
色谱法
质谱法
糖链染色法
如基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）、电喷雾质谱（ESI-MS）等，可对糖基化位点、糖链结构进行分析。
使用特定的糖链染色剂，对糖基化蛋白进行染色，再通过比色或成像分析检测糖基化程度。
细胞株稳定性验证
包括染色体核型分析、FISH检测等，确保细胞株的遗传稳定性。
细胞遗传学检测
通过RT-PCR、WesternBlotting等方法，检测目的基因在细胞株中的表达稳定性。
基因表达稳定性检测
测定细胞株的生长曲线、倍增时间等，评估其生长稳定性。
细胞生长特
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