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主讲老师:郭巧玲ZhangzhouInstituteofTechnolony氨基酸的理化特性
氨基酸的重要理化性质一、物理性质1.物理性状和熔点:α-氨基酸均为无色结晶,熔点极高,一般在200—300oC左右。2.溶解度:各种氨基酸在水中溶解度差别很大,有的难溶,有的易溶。3.味感:氨基酸的味感与其立体构型有关。4.旋光性:除甘氨酸外,所有的氨基酸都有不对称碳原子,因此具有旋光性。
氨基酸的重要理化性质二、两性解离及等电点负离子两性离子正离子AA分子中既有酸性的-COOH,又有碱性的-NH2,在水溶液中既能解离出H+,又能接收H+,因此具有两性。pHpIpH=pIpHpI在溶液中氨基酸所带正、负电荷数相等时,净电荷为零,在电场中不移动,此时溶液的pH值称为该氨基酸的等电点(pI)。概念:氨基酸的等电点
氨基酸的重要理化性质中性氨基酸等电点在5~6.3;酸性氨基酸等电点在2.8~3.2;碱性氨基酸在7.6~10.8。等电点时,氨基酸的溶解度最小,容易沉淀。
氨基酸的重要理化性质(4)pI的测定:酸碱滴定法;基于aa所带基团均可解离;得到弱酸弱碱曲线;根据aa上可解离基团的pK值计算等电点:pK:解离常数。以甘氨酸为例:
氨基酸的重要理化性质由此可知:生理pH内,aa的羧基和氨基全部解离;具有这种性质的物质称两性电解质;带有相反基团的分子叫两性离子;滴定中Gly的阳离子(R+)、阴离子(R-)和两性离(R°)的比例随pH而变;当溶液中只有两性离子时,pH=pI
氨基酸的重要理化性质总结a、各种aa的pI不同;b、同一pH下,各种aa所带电荷不同;pH<pI:aa+pH>pI:aa-用离子交换、电泳将aa分开c、处于pI时,aa溶解度最小,易沉淀;可分离aa。
氨基酸的重要理化性质三、氨基酸的化学性质(I)●氨基的化学反应:◆与茚三酮(ninhydrin)的反应定量反应◆与亚硝酸的反应范斯莱克氨基氮测定法◆与2,4-二硝基氟苯(FDNB)的反应测序◆与甲醛的反应氨基滴定◆与酰化基的反应氨基保护基◆与二甲基氨基萘磺酰氯(DNS-Cl)的反应测序◆与荧光胺的反应微量检测■与Edman试剂(苯异硫氢酸)和测序有色Edman试剂的反应
氨基酸的重要理化性质(三)氨基酸的化学性质1.与亚硝酸反应范斯莱克氨基氮测定法2.与甲醛反应3.与茚三酮反应定量反应4.脱羧反应5.成盐反应6.与金属离子反应7.羰氨反应(美拉德反应)
氨基酸的重要理化性质1.与亚硝酸反应a-羟基酸a-氨基a-氨基可与亚硝酸作用放出氮气(N2)HNO2用气体分析仪测定生成氮气的体积,即可计算出氨基酸的含量,应注意放出的N2仅有一半来自氨基酸。这是范氏(VanSlyke)定氮法的基础。此法可用于氨基酸定量及蛋白质水解程度的测定。
氨基酸的重要理化性质2.与甲醛反应氨基酸虽是两性电解质却不能用酸、碱滴定法测定,这是因为其等电点pH值或过高或过低,没有适当的指示剂。用甲醛处理氨基酸增强了氨基酸分子—+NH3基的酸性解离,从而可用酚酞作指示剂用NaOH滴定。氨基酸的甲醛滴定是测定氨基酸的一种常用方法。
氨基酸的重要理化性质3.与茚三酮的反应在弱酸性溶液中,氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热生成蓝紫色的物质并放出CO2。两个亚氨基酸——脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生黄色化合物。氨基酸的电泳分析中,常用茚三酮作显色剂
氨基酸的重要理化性质氨基酸与茚三酮的反应:α-氨基酸与水合茚三酮溶液共热,引起aa氧化脱氨、脱羧,水合茚三酮与反应产物(氨和还原型茚三酮)生成兰紫色化合物(Pro和Hyp呈黄色),色深与溶液中氨基浓度成正比。
氨基酸的重要理化性质应用:可定性或定量测定各种氨基酸。a、根据颜色深浅,在570(440)nm处测OD值,可知样品中氨基酸含量。b、定量释放的CO2可用测压法测量,计算出参加反应的aa量。c、蛋白质和多肽亦可反应,但灵敏度差。
氨基酸的重要理化性质4.脱羧反应NH2COOHCHR脱羧酶CHRNH2+
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