生物技术制药第四章抗体制药 (2).pptVIP

单链抗体的优点：1.可去除非特异性反应的竞争性表面蛋白，肿瘤显象背景更加清晰性。2.分子小，仅为完整单体Ig的1/6，易渗透肿瘤组织中增加药物治疗浓度，可用于肿瘤的诊断和治疗。3.免疫源性小，可消除人抗鼠的排异反应。4.在体内循环的半衰期短，易清除，利于解毒排出;5.为单链，易于分子改造，与毒素或酶基因拼接成免疫毒素或酶标抗体等，便于直接杀伤靶细胞。6.可在原核系统表达，易于基因工程操作；可由大肠杆菌发酵，进行批量生产。第126页，共193页，星期日，2025年，2月5日单链抗体的缺点：1.稳定性低。scFv分子内VH和VL间相互作用力较弱，不足以完全抵消分子间作用力，故易凝聚成scFv二聚体和多聚体。2.功能单一，仅能与一种抗原特异性结合3.亲和力低，稳定性差，体内清除过快。单链抗体的不足限制了它在生物学、医学及疾病的诊治方面的广泛应用，近年来，发展了结合性能良好的scFv多聚体，并取得了突破性进展。第127页，共193页，星期日，2025年，2月5日 单域抗体即为VH，约为完整分子的1/12。它只由一个结构域构成，故称单域抗体（singledomainantibody，sdAb），又称纳米抗体（nanobody）或重链抗体（heavychainantibody，hcAb），是从骆驼科动物和鲨鱼的血清中分离出的一种抗体。单域抗体尽管亲和力有所降低，但仍保持着原单抗的特异性。(3)单域抗体VH为抗体的分子构建提供了一个新方法。基于单域抗体的一系列优点，在免疫实验、诊断与治疗中，它将发挥超乎想象的巨大功能。第128页，共193页，星期日，2025年，2月5日约为完整分子的1/80-1/70大小，一般由一个CDR构成，它也保持着抗体的特异性。(4)分子识别单位CDRCDR区基因编码蛋白能模拟抗体结合活性，称其为分子识别单位（MRU），CDR片段为抗体结合抗原的最小片段。抗原特异性结合能力主要由CDR3决定，所构建的CDR3小肽段在体内、体外仍具有抗原结合能力和一定亲和力。然而，这些小抗体片段不能取代完整可变区的作用，并且亲和力极低，在实际应用中有很大的局限。第129页，共193页，星期日，2025年，2月5日第四节多功能抗体及其制备一、双功能抗体二、多功能抗体三、抗体融合蛋白第130页，共193页，星期日，2025年，2月5日双链抗体（Diabody）一词最早由Hollinger等于1993年创造。乃是一种小分子的双价双特异性抗体片段。一、双功能抗体第131页，共193页，星期日，2025年，2月5日将A抗原抗体重链的可变区与B抗原抗体轻链的可变区通过短肽链接构建成双链抗体的表达质粒，表达后形成双特异性抗体。连接肽长度5~10个aa为宜第132页，共193页，星期日，2025年，2月5日 双功能抗体就是双特性单链抗体 双特异性单链抗体(bispecificsingle-chainFvs,bisFvs)是一种非天然性抗体，将不同来源的两条高特异性、高亲和力的scFv组合成的具有两种不同抗原结合特征的新型抗体。bisFvs由于具有独特的与两个抗原位点结合的能力，具有广阔的应用前景，如导向药物载体，效应细胞识别、连接，免疫阻断抗体，免疫诊断试剂等，特别是用于肿瘤的诊断和治疗。第133页，共193页，星期日，2025年，2月5日双功能抗体构建方法：⒈化学交联法 共价连接.关键是选择具有一定的柔韧性，但不影响两端scFv复性、结合特征的适当连接肽。⒉生物学方法 非共价二聚体。也可通过分泌性原核表达系统，可直接获得有功能的bisFvs分子。⒊基因工程法 获得二聚化bisFvs分子。第134页，共193页，星期日，2025年，2月5日双功能抗体的优点：一个臂识别肿瘤细胞表面抗原，包括肿瘤相关抗原、癌基因产物、特殊的白细胞分化抗原、病毒蛋白抗原、特异性受体等，并有效结合；另一个臂可识别免疫效应细胞及分子。第135页，共193页，星期日，2025年，2月5日即scFv的多聚体，二聚体、三聚体、三聚体等。多聚体之间的转换只依赖连接肽长度的变化，形成了多价、多效能、高亲和力的新型小分子抗体。多功能抗体克服了scFv在体内清除过快的不足。二、多功能抗体第136页，共193页，星期日，2025年，2月5日多功能抗体具有高亲和力性能，可同时与细胞膜上相邻的多个靶抗原结合。影响结合有两个因素：Fv分子的排列方向（VH-VL是VL-VH结合性能的10~20倍）细胞表面靶抗原结合位点方向的一致性（保证了多价Fv分子可同时与之进行高亲和性结合）与肿瘤细胞表面抗原的多价结合有利于肿瘤的影像