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DB13

河北省地方标准

DB13/T5145—2019

鸡肉、鸭肉中金刚烷胺、金刚乙胺、索金刚胺残留检测方法酶联免疫吸附法

2019-12-27发布2020-01-28实施

河北省市场监督管理局发布

DB13/T5145—2019

I

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由河北省农业农村厅提出。

本标准起草单位：河北省兽药监察所、河北英茂生物科技有限公司、北京维德维康生物技术有限公司、秦皇岛市农产品质量安全监督检验中心、承德市畜禽水产品质量检验监测中心、石家庄市畜产品质量监测中心、唐山市食品药品综合检验检测中心、邢台市动物卫生监督所、邢台市农业农村局、邢台市畜牧站。

本标准主要起草人：王萍、刘怡菲、翟明成、李研东、闫超、李海龙、马立才、张嘉楠、刘力、李云、崔沙沙、赵芳、武侠均、钱春彩、左佳、孟令庄、李文香、李肖莉、陈宝明。

DB13/T5145—2019

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鸡肉、鸭肉中金刚烷胺、金刚乙胺、索金刚胺残留检测方法酶联免疫吸附法

1范围

本标准规定了鸡肉、鸭肉中金刚烷胺、金刚乙胺、索金刚胺残留量酶联免疫吸附（ELISA）法的制样和检测方法。

本标准适用于鸡肉、鸭肉中金刚烷胺、金刚乙胺、索金刚胺残留量的快速筛选测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注的日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3制样

3.1样品的制备

取新鲜或冷冻的空白或供试组织，去除脂肪和筋膜，绞碎均质。

3.2样品的保存

-20℃以下贮存，保存期6个月。

4测定方法

4.1原理

本方法的测定原理是竞争性酶联免疫反应。酶标板微孔上预包被有偶联抗原，加标准品或待测样品后，再加抗金刚烷胺抗体，包被抗原与加入的标准品或待测样品竞争抗体，通过洗涤除去游离的抗原、抗体及抗原抗体结合物。再加入酶标记物，酶标记物与抗体结合。加入底物液后，结合到板上的酶标记物使底物显色。加终止液，用酶标仪测量微孔溶液的吸光度值，金刚烷胺浓度与吸光度值成负相关，按绘制的校正曲线定量计算。

4.2试剂和材料

以下所用试剂，除特殊注明外均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的二级水。

a)乙腈；

b)正己烷；

c)金刚烷胺类药物试剂盒，组成见附录B；

DB13/T5145—2019

2

d)样品稀释工作液：用水将浓缩样品稀释液（附录B.7）按1：19体积比进行稀释，混匀后备用；

e)洗涤工作液：用水将浓缩洗涤液（附录B.8）按1：19体积比进行稀释，混匀后备用。

4.3仪器和设备

a)分析天平：感量0.01g；

b)旋涡振荡器；

c)离心机：转速4000rpm以上；

d)氮气吹干仪；

e)酶标仪（配备450nm、630nm滤光片）；

f)单道微量移液器：20μL～200μL，100μL～1000μL和1mL～5mL；

g)多通道微量移液器：50μL～300μL；

h)恒温箱；

i)计时器：精确到秒；

j)离心管：15mL、50mL。

4.4测定步骤

4.4.1试料的制备

试料的制备包括：

——取制备后的供试样品，作为供试试料；

——取制备后的空白样品，作为空白试料；

——取制备后的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液作为空白添加试料。

4.4.2试样提取、净化

准确称取试样3g±0.05g于50mL离心管中，加入50μL样品提取剂、6.0mL乙腈，充分涡动2min；室温（25℃±5℃)下4000rpm离心5min；取3.0mL上清液于15mL干净离心管中；60℃~70℃水浴氮气吹干；加入2mL正己烷充分涡动30s，再加入1.0mL样品稀释液，充分涡动30s；4000rpm离心5min；弃去上层正己烷及中间层杂质；取50μL进行检测。

4.4.3试样测定

4.4.3.1测定条件

所有操作应在25℃±5℃条件下进行，金刚烷胺检测试剂盒中所有试剂的温度均应回升至相应温度后方可使用。

4.4.3.2测定步骤

将50μL各标准品工作液/样品溶液分别加入对应的孔中；每孔中加入50μL酶标记物工作液和50μL抗体工作液，振荡酶标板10s充分混匀，室温