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生物化学实验PART1

生物化学实验内容醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白质双缩脲测定蛋白质的含量血液葡萄糖的测定牛乳酪蛋白提取与鉴定维生素C的提取与含量的测定琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制酶的基本性质要求：课前预习，试验中做记录，课后写实验报告。两人一组，离开实验室时签字。

实验一血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳01了解电泳技术基本原理，掌握醋酸纤维薄膜电泳操作技术。目的：02蛋白质是两性电解质，在非等电点状态下在电场中会向一定电极移动。在碱性条件下多数蛋白质带负电荷，在电场中向正极移动，不同蛋白质由于大小、所带电荷及形状不同，在电场中的迁移率不同，经过电泳可将其分开，结果经染色、漂洗，得电泳图谱。材料：血清原理：

pH8.6巴比妥缓冲液滤纸吸去膜上液体醋酸——————————→浸泡——————————→点样纤维薄膜10min沾血清点在无光泽面上2mA/条膜染色液漂洗液—————→电泳—————→染色———————→漂洗40min5min浸泡漂洗数次——→观察电泳谱带电泳槽示意图滤纸桥+——点样处——+醋酸纤维薄膜电泳图谱薄膜点样端三、步骤：

电泳装置

点样

实验二双缩脲测定蛋白质含量实验目的掌握双缩脲测定蛋白质的方法和原理实验原理双缩脲在碱性溶液中与Cu2+产生紫色的络合物,这一反应称“双缩脲反应”。蛋白质分子中肽键，也能与Cu2+发生双缩脲反应，溶液紫色的深浅与蛋白质含量在一定范围内成正比，而与蛋白质的氨基酸组成及分子量无关。该紫色的络合物在580nm处有最大吸收值。

三、实验步骤1、标准曲线制作（已制好）2、样品测定编号123豆粉（g）00.10000.1000碳酸铜（g）1.001.001.00无水乙醇（ml）2020.0020.0010%KOH（ml）2020.0020.00振荡10min，静置片刻，将上清过滤后580nm测定吸光值OD540标线上查出的Pr的量

3、结果计算×1001=2豆粉（g）3样品蛋白质含量（%）4标准曲线上查得蛋白质含量（g）5

实验三血液葡萄糖的测定一、实验目的学习和掌握Folin-吴宪法测定血糖的方法二、实验原理G＋Cu2+碱性氧化亚铜磷钼酸＋钼蓝420nm处有大吸收峰

三、实验步骤血糖试剂（ml）空白管低浓度标准管高浓度标准管测定管无蛋白血滤液蒸馏水标准葡萄糖应用液碱性铜试剂—2.0—2.0—1.01.02.0——2.02.01.01.0—2.0混匀，置沸水浴中煮8分钟，取出，用流动的自来水冷却3分钟（切勿摇动血糖管）磷钼酸试剂2.02.02.02.01：4磷钼酸溶液加D420

测定管光密度100×0.2×=葡萄糖mg/100ml标准管光密度0.1高标准管：低标准管：×0.1×=葡萄糖mg/100ml标准管光密度0.1测定管光密度100四、计算

实验四牛奶中蛋白质的提取与鉴定实验目的学习从牛奶中制备酪蛋白的方法并进行鉴定试验实验原理蛋白质等电点沉淀实验步骤酪蛋白的制备

鲜牛乳3Oml（40℃）+3Om醋酸缓冲液（40℃）边加边摇动添加标题晾干，鉴定添加标题弃掉添加标题离心3000r/5min添加标题冷却至室温，继续放置5分钟添加标题清液（乳清）添加标题沉淀添加标题加热观察现象添加标题醇醚混合物洗2次添加标题沉淀添加标题清液添加标题

2、酪蛋白的性质鉴定溶解度观察溶液H2O10%NaCl0.5%Na2CO30.1MNaOH0.2%HCl饱和Ca(OH)2试剂量2ml2ml2ml2ml2ml2ml酪蛋白少许少许少许少许少许少许溶解情况

2.米伦反应：单击此处添加小标题观察现象单击此处添加小标题煮沸单击此处添加小标题含硫(胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸)测定:少量酪蛋白+lmlO.1MNaOH+5%醋酸铅1-3滴单击此处添加小标题少许酪蛋白+lmlH2O+米伦试剂10滴，振摇，加热观察其颜色变化

实验五维生素C的定量测定

（2，6-二氯酚靛酚滴定法）1实验目的掌握