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研究过表达PRKAA1对山羊肌内前体脂肪细胞脂质沉积的影响
目录
文档综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3
1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6
1.1.1PRKAA1基因概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6
1.1.2肌内前体脂肪细胞脂质沉积的重要性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8
1.2国内外研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9
1.2.1PRKAA1基因表达与脂代谢．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10
1.2.2肌内脂肪沉积与动物生产性能．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11
1.3研究目的与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15
1.3.1研究目标．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15
1.3.2主要研究内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16
材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17
2.1实验动物与分组．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18
2.1.1实验动物来源与基本信息．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19
2.1.2动物分组与处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21
2.2PRKAA1过表达载体的构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22
2.2.1质粒载体选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23
2.2.2PRKAA1基因扩增与连接．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23
2.2.3载体转染与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25
2.3肌内前体脂肪细胞的分离与培养．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26
2.3.1肌内前体脂肪细胞的分离方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28
2.3.2细胞培养与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29
2.4脂质沉积的检测方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30
2.4.1总脂质含量的测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31
2.4.2甘油三酯含量的测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32
2.4.3脂肪细胞形态观察．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33
2.5相关指标的检测方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35
2.5.1基因表达水平的检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36
2.5.2蛋白表达水平的检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37
2.6数据统计分析方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38
结果与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39
3.1PRKAA1过表达载体的构建与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40
3.1.1载体转染效率的鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43
3.1.2PRKAA1基因过表达的验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44
3.2肌内前体脂肪细胞的分离与培养．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45
3.2.1细胞分离效果观察．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46
3.2.2细胞形态学特征．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46
3.3过表达PRKAA1对肌内前体脂肪细胞脂质沉积的影响．．．．．．．．．．48
3.3.1脂质沉积量的变化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．
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