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细胞储存操作图解
演讲人：
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目录
CONTENTS
01
操作流程总述
02
采集前准备工作
03
细胞样本处理规范
04
低温储存实施方案
05
质量控制与记录
06
应用场景延伸
01
操作流程总述
细胞储存是指在特定条件下，将细胞或其组分长期保存，以便在需要时复苏和使用。
细胞储存基本概念
细胞储存的主要目的是保持细胞的活性、功能和遗传信息，以便在细胞治疗、基础研究、疾病模型等领域使用。
常见的细胞储存方法包括低温储存（如液氮储存）和常温储存（如细胞培养箱）。
核心操作步骤分解
细胞收集
细胞计数与活力评估
细胞冷冻保护
细胞储存容器准备
细胞冷冻储存
从供体或细胞系中获取细胞，并进行适当的处理和分离。
使用细胞计数器和台盼蓝等染色方法评估细胞数量和活力。
添加冷冻保护剂（如二甲基亚砜）到细胞悬液中，以防止细胞在冷冻过程中受损。
选择合适的储存容器（如细胞冻存管、细胞储存袋等），并进行消毒和预处理。
将细胞悬液转移到储存容器中，并放置在液氮罐或其他适当的冷冻设备中长期保存。
关键安全注意事项
无菌操作
在整个细胞储存过程中，必须严格遵循无菌操作规范，防止细胞污染。
02
04
03
01
储存时间
细胞储存时间应尽量缩短，以避免细胞老化和遗传信息变异。
合适的温度
细胞储存环境的温度必须控制在适当的范围内，以确保细胞的存活和活力。
复苏与验证
在使用储存的细胞之前，必须进行细胞复苏和活力验证，以确保细胞在储存过程中未受损并适合使用。
02
采集前准备工作
无菌环境配置标准
采用高效过滤器，确保操作环境中的空气质量。
空气净化系统
使用专业消毒剂对操作台面、设备、容器等进行彻底清洁和消毒。
清洁和消毒
操作人员需穿戴无菌手套、口罩和帽子，遵循无菌操作规程。
无菌操作
样本类型与采集容器
01
样本类型
根据不同的实验需求，选择合适的样本类型，如血液、组织、细胞悬液等。
02
采集容器
根据样本类型选择适当的采集容器，如无菌试管、离心管、采样瓶等，确保容器密封、避光、无菌。
试剂耗材预检流程
试剂耗材质量验证
对关键试剂耗材进行质量验证，如培养基的无菌检测、酶的活性检测等，确保实验结果准确可靠。
03
根据实验需求，提前准备好所需的试剂耗材，如培养基、离心管、移液器、吸头等。
02
试剂耗材准备
试剂耗材检查
检查试剂耗材的包装是否完整、标签是否清晰、是否在有效期内等。
01
03
细胞样本处理规范
离心分离技术参数
离心速度
离心时间
温度控制
离心后处理
根据细胞类型和分离要求调整，避免细胞损伤。
依据细胞分离需求，避免长时间离心导致细胞死亡。
保持恒定温度，防止细胞因温度变化而受损。
轻轻取出上清液，避免细胞团块破裂。
保持适当细胞密度，避免过度拥挤导致细胞死亡。
细胞密度控制
严格遵循无菌技术，防止细胞污染。
无菌操作
01
02
03
04
使用适合细胞生长的培养基，含有必需营养物质。
培养基选择
提供适宜温度、气体环境和湿度，确保细胞正常生长。
细胞培养环境
细胞活性保护措施
分装标记统一规则
分装容器
使用无菌、密封、可标识的容器进行分装。
01
标记内容
包括细胞名称、来源、数量、分装日期等信息。
02
标记位置
在容器醒目位置进行标记，便于识别和查找。
03
标记字迹
使用不易褪色的笔或标签纸进行标记，确保信息清晰可辨。
04
04
低温储存实施方案
液氮储存罐操作指南
液氮储存罐选择
液氮添加
储存罐预冷
储存罐维护
选择高质量、高真空多层绝热结构的液氮储存罐，确保液氮长期储存不挥发。
在储存细胞前，需将储存罐预冷至液氮温度，避免细胞受损。
在储存罐内添加液氮时，应缓慢进行，避免由于温度突然变化而引起的细胞破裂。
定期检查储存罐的真空度和密封性，确保储存环境的稳定性。
程序降温控制要点
制定合适的降温程序，避免细胞在降温过程中因温度骤变而受损。
降温速率
确保储存室内各区域温度均匀，避免温度梯度过大对细胞造成影响。
温度梯度
在降温过程中，需实时监测温度变化，确保降温程序顺利进行。
降温阶段监控
温度实时监测系统
包括温度传感器、数据采集器、报警装置等，实现温度实时监测。
监测系统组成
监测点位设置
数据记录与分析
在储存室内设置多个监测点位，确保各区域温度都能被准确监测。
实时记录温度数据，并进行分析处理，如有异常及时报警并采取措施。
05
质量控制与记录
细胞复苏存活率检测
检测方法
采用荧光染色或流式细胞术等方法，检测细胞复苏后的存活率。
01
存活率标准
细胞存活率应不低于90%，以保证细胞在储存过程中的活力。
02
检测频率
每次细胞复苏后均需进行存活率检测，并记录检测结果。
03
污染风险排查方法
污染处理措施
发现污染后，立即采取隔离、消毒、更换试剂等处理措施，防止污染扩散。
03
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