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基于分子生物学的无乳链球菌快速检测方法研究
目录
一、文档概括．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3
1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3
1.1.1无乳链球菌概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
1.1.2无乳链球菌感染的流行病学现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5
1.1.3快速精准检测方法的重要性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7
1.2国内外研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9
1.2.1无乳链球菌传统检测技术评析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10
1.2.2分子生物学检测技术的应用进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11
1.2.3快速检测方法面临的挑战．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12
1.3本研究的主要目标与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13
1.3.1研究目标设定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14
1.3.2主要研究内容概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14
二、基础理论依据．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15
2.1无乳链球菌的生物学特性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16
2.1.1形态结构特征．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18
2.1.2生理生化特性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20
2.1.3分子遗传学特征．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21
2.2分子生物学检测原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23
2.2.1核酸杂交技术原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23
2.2.2聚合酶链式反应技术原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25
2.2.3其他相关分子标记技术简介．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26
三、基于分子生物学的快速检测方法构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
3.1检测靶标基因的选择与验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29
3.1.1靶基因的筛选依据．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30
3.1.2特异性与敏感性评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32
3.2检测引物与探针的设计合成．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33
3.2.1引物/探针设计策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35
3.2.2设计序列的优化与合成．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36
3.3检测体系的建立与优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38
3.3.1PCR扩增条件的优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40
3.3.2体系组成成分的筛选．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41
3.3.3检测灵敏度的提升策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42
四、检测方法的实验室验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43
4.1主要仪器与试剂．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44
4.1.1实验仪器设备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47
4.1.2关键试剂与耗材．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．48
4.2实验方法学验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50
4.2.1标准菌株实验．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50
4.2.2灵敏度
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