蛋白酶溶菌酶.pptVIP

N-乙酰葡萄糖胺的β(1-4)键多聚物是溶菌酶的底物。它们间形成一聚、二聚、三聚、四聚体，是溶菌酶的抑制剂。SDS结合到活性位上强烈抑制了溶菌酶活性。除此之外其它和溶菌酶形成络合物的物质有：胸腺泡核、酵母泡核、甲状腺素、甲状腺球蛋白、α-La、咪唑核吲哚衍生物。阳离子如Co2+、Mg2+、Hg2+、Cu2+等均可抑制溶菌酶的活性(10-3～10-2mol/L)。第30页，共40页，星期日，2025年，2月5日2.4溶菌酶的抗菌机理溶菌酶能有效地水解细菌细胞壁的肽聚糖，其水解位点是N-乙酰胞壁酸(NAM)的l位碳原子和N-乙酰葡萄糖胺(NAG)的4位碳原子间的β-l，4糖苷键，结果使细菌细胞壁变得松弛，失去对细胞的保护作用，最后细胞溶解死亡。肽聚糖的结构水解位点第31页，共40页，星期日，2025年，2月5日第1页，共40页，星期日，2025年，2月5日蛋白酶水解示意图：第2页，共40页，星期日，2025年，2月5日1.1蛋白质的特异性要求1、R1和R2基团的性质：胰凝乳蛋白酶仅能水解R1是酪氨酸、苯丙氨酸或色氨酸残基的侧链的肽键；胰蛋白酶仅能水解R1是精氨酸或赖氨酸残基的侧链的肽键。胃蛋白酶和羧肽酶对R2基团具有特异性要求，如R2是苯丙氨酸残基的侧链，那么这两种酶能以最高速度水解肽键。第3页，共40页，星期日，2025年，2月5日2、氨基酸构型：必须是L型的，天然蛋白质均属L型。3、底物分子大小：对于胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶，底物分子大小不重要，如前述。第4页，共40页，星期日，2025年，2月5日4、X和Y性质：X、Y可以是-H、-OH，也可以继续衍生出去。（1）如果是肽链内切酶，在R1、R2能满足特异性要求的前提下，肽链就能裂开，显然X和Y必须继续衍生出去，内切酶活力才表现出最高。X、Y可以是氨基酸残基。（2）对于肽链端解酶的羧肽酶，要求底物中Y是一个-OH，其特异性对R2有严格要求。在X不是-H时，可表现高活力。（3）对于肽链端解酶的氨肽酶，要求底物中X是一个-H，优先选择Y不是-OH，特异性表现在R1上。第5页，共40页，星期日，2025年，2月5日5、对肽键的要求：大多数蛋白酶不仅限于水解肽键，尚能作用于酰胺（-NH2）、酯（-COOR）、硫羟酸酯（-COSR）和异羟污酸（-CONHOH）胃蛋白酶和其它一些酸性蛋白酶对水解键有较高识别能力。如肽键→脂键，即使R2满足要求也不能作为底物。第6页，共40页，星期日，2025年，2月5日1.2蛋白酶分类：（1）植物（2）动物（3）微生物菠萝、木瓜、无花果胃、胰蛋白酶、凝乳酶（胃）1398枯草杆菌、3942栖土曲霉蛋白酶、放线菌蛋白酶按来源分类第7页，共40页，星期日，2025年，2月5日（1）中性蛋白酶：（2）碱性蛋白酶：（3）酸性蛋白酶：pH5~81398枯草杆菌、3942栖土曲霉蛋白酶pH9~112709枯草杆菌蛋白酶pH2.5~4胃蛋白酶按作用条件分类第8页，共40页，星期日，2025年，2月5日（2）外肽酶：（1）内肽酶：产物为脲、胨、多肽、低肽羧肽酶：从以羧基末端氨肽酶：从氨基末端按对底物作用方式分类第9页，共40页，星期日，2025年，2月5日（1）丝氨酸蛋白酶（2）巯基蛋白酶（3）金属蛋白酶几乎都是内肽酶，如胰蛋白酶、凝血酶等。pH8-10如木瓜、菠萝蛋白酶，盐水失活，EDTA可激活如胰羧肽酶A，EDTA可失活根据酶活性部位分类（4）酸性蛋白酶最适pH2.5~4胃蛋白酶第10页，共40页，星期日，2025年，2月5日1.3木瓜蛋白酶：第11页，共40页，星期日，2025年，2月5日其酶活性部位中含有巯基，属巯基蛋白酶。木瓜蛋白酶存在于木瓜汁液中，分子量23900。至少有3个氨基酸残基存在于酶的活性部位，它们是Cys25（半胱）、His159（组）和Asp158（天冬）。当Cys25被氧化剂氧化或与重金属离子结合时，酶活力被抑制，而还原剂半胱氨酸（或亚硫酸盐）或EDTA能恢复酶的活力。还原剂作用：从-S-S——-SH，EDTA螯合重金属离子。第12页，共40页，星期日，2025年，2月5日木瓜蛋白酶在pH5时，有良好稳定性，而在pH3或11时酶很快失活，最适pH随底物改变。木瓜蛋白酶具有较高的耐热性，酶液在pH7和70度下加热30分钟，而使牛乳凝结的活力仅下降20%。木瓜蛋白酶对酯和酰胺类底物表现出很高的活力。第13页，共40页，星期日，2025年，2月5日1.4酸性蛋白酶：（重点介绍凝