时基因工程的基本工具.pptVIP

1.构建基因表达载体目的使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。第二步：基因表达载体构建2.基因工程载体的构建需要考虑的因素（1）基因的特点（2）要选择强启动子（3）要有选择标记基因第31页，共67页，星期日，2025年，2月5日4.基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因所有生物的DNA的基本结构相同（不同生物DNA都是由4种脱氧核苷酸构成，都具有双螺旋结构，都遵循A-T、G-C的碱基配对原则）3.不同生物的DNA可以拼接在一起的原因：第32页，共67页，星期日，2025年，2月5日启动子、终止子以及起始密码子、终止密码子所存在的位置及作用？

?启动子、终止子存在于DNA上；起始密码子、终止密码子存在于mRNA上。?启动子并不是转录的起点，是RNA聚合酶识别和结合的位点;起始密码子是翻译的起点。第33页，共67页，星期日，2025年，2月5日（08年江苏高考）将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。注意基因克隆载体与基因表达载体的区别第34页，共67页，星期日，2025年，2月5日载体(vector）：用于承载、克隆、转移目的基因(DNA片段)，能自我复制的DNA分子。（1）在基因克隆时：将目的片段转移到宿主细胞中进行复制克隆——克隆载体；（2）在基因导入受体时：将目的片段转移到受体细胞中使目的片段稳定存在并表达——表达载体。目的基因启动子和终止子复制原点标记基因多种单一限制酶切点合适大小DNA片段复制原点标记基因多种单一限制酶切点合适大小第35页，共67页，星期日，2025年，2月5日活动2：体验基因表达载体的构建过程下图是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图（示部分基因及部分限制性内切酶作用位点），思考回答：√×√√×√√√第36页，共67页，星期日，2025年，2月5日①人工改造时，要使抗虫基因表达，还应插入____________。②人工改造时用限制酶Ⅱ处理，其目的是：第一，去除质粒上的（基因），保证T-DNA进入水稻细胞后不会引起细胞的无限分裂和生长；第二，使质粒带有单一限制酶作用位点，有利于___________。第三，使质粒大小合适，可以提高转化效率等。③若用限制酶Ⅰ分别切割改造过的理想质粒和带有抗虫基因的DNA分子，并构成重组Ti质粒。分别以含四环素和卡那霉素的培养基培养已成功导入抗虫基因的水稻胚细胞，观察到的细胞生长的现象是。①启动子②tms和tmr（2分）目的基因（或外源DNA）准确插入③在含卡那霉素的培养基能够生长，而在含四环素的培养基中不能生长第37页，共67页，星期日，2025年，2月5日你知道双酶切法吗？（2010年江苏高考）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止___________________。×√√√质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化第38页，共67页，星期日，2025年，2月5日将同一种限制酶切割的质粒与目的基因片段混合，加入DNA连接酶，两两连接的产物有几种？目的基因与目的基因的连接物目的基因与质粒的连接物质粒与质粒的连接物第39页，共67页，星期日，2025年，2月5日原核细胞表达真核细胞表达植物中表达动物中表达人体表达发酵工程转基因植物动物器官发生器转基因动物基因治疗目的基因转移转化或感染合成基因组织、器官、细胞基因组DNAcDNA文库基因文库目的基因的克隆基因工程的基本操作程序第三步：将目的基因导入受体细胞第四步：目的基因的检测与鉴定第40页，