离子交换层析.ppt

1.装柱与加样量样品的准备样品应与起始缓冲液有相同的pH和离子强度，可用透析、凝胶过滤或稀释法达此目的。样品的不溶物应在透析后或凝胶过滤前以离心法除去。2.洗脱原则：增加离子强度、改变pH值方式：梯度洗脱（Gradientelution）阶段洗脱(Stepwiseelution)**第62页，共82页，星期日，2025年，2月5日**第63页，共82页，星期日，2025年，2月5日离子强度的线性梯度洗脱曲线p86盐浓度吸收曲线**第64页，共82页，星期日，2025年，2月5日离子强度非线性梯度(阶梯式洗脱曲线)**第65页，共82页，星期日，2025年，2月5日疏水性离子交换剂具有如下特性而被广泛应用：大量的活性基团较高的交换容量良好的机械强度稳定的物理化学性质均匀的球形颗粒、型号齐全以及丰富的产品**第30页，共82页，星期日，2025年，2月5日2.亲水性离子交换剂亲水性离子交换剂的基质是一类天然的或人工合成的、与水结合力较大的物质。有：纤维素Sephacel、交联葡聚糖Sephadex交联琼脂糖Sepharose**第31页，共82页，星期日，2025年，2月5日1）纤维素Sephacel离子交换剂基本结构:以微晶纤维素为基质，化学方法引入电荷基团，构成各种阳离子、阴离子交换剂;示弱阴离子树脂的结构（DEAE-Sephacel）BeadedCellulose-O-CH2-CH2N+-H-Cl-CH2CH3CH2CH3**第32页，共82页，星期日，2025年，2月5日**第33页，共82页，星期日，2025年，2月5日2)交联葡聚糖Sephadex离子交换剂以交联葡聚糖G－25和G－50为基质，化学法引入电荷基团构成各种阴离子、阳离子交换剂。（DEAE-Sephadex、QAE-Sephadex）。DEAE-Sephadex-O-CH2-CH2-N+-H-Cl-QAE-Sephadex-O-CH2-CH2-N+-CH2-CH(OH)-CH3-Cl-CH2CH3CH2CH3CH2CH3CH2CH3**第34页，共82页，星期日，2025年，2月5日**第35页，共82页，星期日，2025年，2月5日3)琼脂糖Sepharose离子交换剂以交联琼脂糖CL-6B为基质，化学法引入电荷基团构成阳离子交换剂CM－SepharoseCL-6B和阴离子交换剂DEAE-SepharoseCL-6B。CM(SepharoseCl-6B)-O-CH2-C-02Na+DEAE-SepharoseCl-6B-O-CH2-CH2-N+-H-Cl-CH2-CH3CH2-CH3**第36页，共82页，星期日，2025年，2月5日亲水性离子交换剂的结构琼脂糖离子交换剂的基本结构以交联琼脂糖CL－6BSepharose为基质。其网孔的大小通过交联剂的比例调节，适合分离各种不同分子量的物质。**第37页，共82页，星期日，2025年，2月5日ScanningelectronmicrographofanagarosegelMagnificationx50,000Ref: AndersS.Medin,PhDThesis,UppsalaUniversity1995**第38页，共82页，星期日，2025年，2月5日二、离子交换剂的性质1.颜色与形状2.交联度3.吸水量或膨胀度4.交换容量5.稳定性6.比重7.流速**第39页，共82页，星期日，2025年，2月5日离子交换剂的性质1.颜色与形状2.交联度:离子交换剂的基质的交联度根据适用的要求，调节交联剂在基质中的比例或百分浓度而制成各种（筛孔）型号的交换剂。3.吸水量与膨胀度：是指离子交换剂在水溶液中吸取的体积，即筛孔中所占的体积（Vi）。吸水量与膨胀度受基质的性质、离子强度、pH、电荷基团及交联度的影响。4.交换容量：离子交换剂与溶液中离子或离子化合物进行交换的能力。**第40页，共82页，星期日，2025年，2月5日离子交换剂的膨胀度与离子强度的关系1）在相同离子强度的条件时,膨胀度随着基质的交联度的增加而降低。2）在相同离子强度的条件时，强酸、强碱型的离子交换剂的膨胀度大，弱酸、弱碱的膨胀度小。说明前者的解离度达最大，带电荷基团之间的排斥力大，结果膨胀度亦大。**第41页，共82页，星期日，2025年，2月5日pH对离子交