基于多组学探究小鼠肺纤维化过程中肠道微生态的变化.pdf

摘要

尘肺病是一种高发于发展中国家的常见职业病。其主要发病原因是由于患者在

工作或生活环境中长期接触以SiO2为主的粉尘，导致肺部出现不可逆的纤维化。近

年来随着对尘肺病的研究不断深入，肠道与肺之间存在着物质和信号的交流，即肠

肺轴或肺肠轴，也逐渐出现在人们的视野中。同时许多关于尘肺病病人和动物模型

的研究中也都观察到肠道菌群发生了变化。本研究拟通过构建小鼠肺纤维化模型，

寻找可能与肺纤维化有关的差异菌群，筛选肺纤维化进程中发挥重要作用的差异表

达基因和代谢通路以探究二氧化硅粉尘胁迫中肺纤维化和肠道菌群的互作关系。本

研究结果如下：

1.构建小鼠肺纤维化模型。对肺纤维化模型小鼠的组织学和相关指标进行检测，

HE染色结果显示，随染尘时间的增加肺泡中出现炎症细胞浸润、肺泡结构塌陷、间

隔增宽等现象；Masson染色观察到肺部蓝染面积逐渐增加；小鼠肺组织中炎症因子

IL-6、TNF-α、TGF-β的含量均显著升高；Collagen1α1、Fbn、Smad3和TGF-β1基因

的表达水平均显著上调；TGF-β通路的中的α-SMA、磷酸化的Smad3和OPN蛋白的

表达均显著上调。综上，小鼠经二氧化硅粉尘胁迫后肺部发生了纤维化。

2.对小鼠的盲肠与结肠进行组织切片染色和肠道屏障相关基因的定量检测。经

HE和AB-PAS染色表明盲肠隐窝结构出现明显破损，杯状细胞数量、隐窝深度、黏

蛋白占比均显著下降，而结肠的指标均显著上升；肠道屏障相关基因E-Cadherin、

Muc2和Zo1在盲肠中显著下调，在结肠中显著上调；且血清中脂多糖的含量也显著

上调。因此，小鼠经二氧化硅粉尘胁迫后盲肠肠道屏障受损较结肠严重。

3.盲肠肠道微生态检测结果。肺纤维化小鼠肠道菌群的α多样性无显著变化，但

β多样性显示菌群的物种组成发生了显著变化。门水平上，厚壁菌门相对丰度显著下

降，疣微菌门相对丰度显著升高；属水平上，乳杆菌属相对丰度显著下降，阿克曼

氏菌属相对丰度显著升高；种水平上，鼠乳杆菌、日本螺杆菌和瑞士肠放线菌相对

丰度显著下降，嗜黏蛋白阿克曼菌和气球菌的相对丰度显著升高，说明盲肠的微生

态环境紊乱。

4.小鼠血清非靶向代谢组检测结果。共获得差异代谢物139个，如缬氨酸、不饱

和磷脂酰乙醇胺、二十二碳六烯酸等。KEGG富集分析结果显示，蛋白质消化吸收、

甘油磷脂代谢、能量代谢等通路发生显著变化。小鼠肺组织转录组测序结果表明，

共获得差异基因1407个。GO富集分析和KEGG富集结果显示，肺中炎症反应发生

显著变化。且富集到肠道免疫网络产生的IgA通路。说明肺组织的变化与肠道的变

化存在相关。

5.将三个组学数据进行联合分析。共找到22种与鼠乳杆菌和嗜黏蛋白阿克曼菌

相关的代谢物；5条关键的代谢通路；两个与差异代谢物相关性完全相反的基因模块。

所得基因模块进行GO与KEGG富集分析的结果显示蓝色模块与细胞分化有关，青

色模块与免疫反应有关。

综上所述，本研究成功构建了小鼠动式染尘模型，发现纤维化小鼠盲肠的肠道

屏障功能下降较为严重。收集小鼠盲肠内容物和血清进行检测，对所得数据和肺组

织转录组数据进行联合分析，初步分析了组学间的相关性和代谢物的作用，为探究

肺纤维化小鼠肠道代谢机制提供了方向。

关键词：肺纤维化；肠道菌群；非靶向代谢组；联合分析

Abstract

Pneumoconiosisisacommonoccupationaldiseasewithahighprevalencein

developingcountries.Themaincauseofthediseaseistheirreversiblefibrosisofthelungs

duetothepatientsprolongedexposuretoSiO2-baseddustintheworkorlivingenvironment.

Inrecentyearswiththeincreasingresearchonpneumoconiosis,theexistenceofmaterial

andsignalcommunicationbetweenthe