生物制药工艺学第四.ppt

（2）工艺路线水解：110-120℃回流水解赶酸：减压浓缩至糊状，加水稀释，重复赶酸三次吸附、脱色：颗粒活性炭柱，进样吸附至流出液出现苯丙氨酸为止，去离子水洗至流出液pH4.0为止，穿柱液与洗涤液合并沉淀：特殊试剂沉淀法（邻二甲苯－4－磺酸）解析：沉淀水洗两次，抽滤，滤饼加去离子水，氨水调pH至6-8，70-80℃保温搅拌1ｈ，冷却，过滤，沉淀再水洗两次第30页，共83页，星期日，2025年，2月5日二、发酵法?（－）基本原理与过程1、发酵的基本原理利用微生物细胞中酶的作用，将培养基中有机物转化为细胞或其它有机物的过程。发酵法是一个从头合成的生物过程，涉及多种酶的参与，其原料主要是碳源、氮源、无机盐和微生物菌种*第31页，共83页，星期日，2025年，2月5日初生氨基酸微生物通过固氮、硝酸还原及自外界吸收氨使酮酸氨基化成相应的氨基酸(Gly,L-Ala,L-Asp，L-Glu)或微生物通过转氨酶作用，将一种氨基酸的氨基转移到另一种酮酸上，生成的新氨基酸(L-Ala,L-Asp)?次生氨基酸在微生物作用下，以初生氨基酸为前体转化成的其它氨基酸(此类Aa占大多数）谷丙转氨酶可使Glu氨基转移到丙酮酸上生成L－Ala谷草转氨酶可使Glu的氨基转移到草酰乙酸上生成L－AspL-Asp是L-Lys的前体，L－Glu是L－Pro的前体*第32页，共83页，星期日，2025年，2月5日图1微生物界糖代谢中间产物及氨基酸之间的转化关系第33页，共83页，星期日，2025年，2月5日2、发酵法的基本过程⑴基本过程培养基配制与灭菌处理菌种诱变与选育菌种培养、灭菌及接种发酵产品提取及分离纯化工业发酵培养基中碳源：淀粉水解糖、糖蜜、甘薯粉等氮源一般为硫酸铵、尿素或豆饼水解液Aa生产菌种主要为细菌，其次是酵母菌1)野生型2)诱变菌株3)杂种菌株4)基因工程菌平板或斜面培养种子培养发酵培养产谷氨酸棒状杆菌,短杆菌产缬氨酸棒状杆菌突变株AS1.586北京棒状杆菌和钝齿棒状杆菌原生质体融合苏氨酸,色氨酸工程菌已工业化*第34页，共83页，星期日，2025年，2月5日⑵氨基酸发酵方式：液体通风深层培养法摇瓶培养发酵罐种子罐培养菌种筛选*第35页，共83页，星期日，2025年，2月5日?（二）发酵法生产的氨基酸品种及工艺?绝大部分氨基酸均可通过发酵法生产发酵法生产Aa存在的问题：产物浓度低，设备投资大，工艺管理要求严格，生产周期长，成本高。*第36页，共83页，星期日，2025年，2月5日1、L-异亮氨酸（L-Isoleucine，L-Ile）的制备（1）结构与性质：外观：菱形叶片状或片状晶体（乙醇中）溶解性：L-Ile溶于热醋酸，20℃乙醇中溶解度为0.072，25℃水中为4.12，75℃水中为6.08，不溶于乙醚。第37页，共83页，星期日，2025年，2月5日（2）工艺路线菌种培养：一级种子培养（斜面→摇瓶,30℃,16h）二级种子培养（接种量3.5％，8h)接种：5m3发酵罐,发酵液装量3吨，接种量1％，发酵条件：180rpm,通气量0.2vvm，30-31℃,60h过滤：发酵液加热至100℃，维持10min,冷却过滤（1），滤液，调pH3.5，过滤（2）去沉淀纯化：H+－732阳离子交换法，滤液流速:树脂量的1.5％/min洗涤：用100L去离子水洗脱：用60℃，0.5mol/氨水3L/min洗脱第38页，共83页，星期日，2025年，2月5日（3）工艺过程①???菌种培养?种子培养基一级种子培养基（%）：葡萄糖2尿素0.3玉米浆2.5豆饼水解液0.1（以干豆饼计）pH6.5。二级种子培养基：另加菜籽油0.4，其余同一级种子培养基。*第39页，共83页，星期日，2025年，2月5日一级种子培养：1000ml三角瓶中培养基装量为200ml，接种斜面AS1.998菌种，30℃培养,16h。二级种子培养：接种量3.5％，培养8h，如此逐级放大培养得足够量菌种。一级种子培养(摇瓶）一级种子罐扩大培养（二级发酵）二级种子罐扩大培养（三级发酵）种子罐接种方式：（1）降压法将茄子瓶接种针插入接种口，降低种子罐压力，菌悬液自动从茄子瓶注入种子罐（2）火焰封口接种