分子生物学检验技术第3章.pptxVIP

第三章蛋白质组与蛋白质组学中南大学罗建新

第三章蛋白质组与蛋白质组学DNAmRNA蛋白质转录翻译基因蛋白质细胞特异性基因表达生理状态蛋白质相互作用温度应激状态培养条件药物作用数量有限结构相对稳定复杂性多变性直接反应生命现象复杂的调控

第一节蛋白质组与蛋白质组学的定义第二节蛋白质组及其质点的分离与分析第三节蛋白质相互作用的研究第四节蛋白质数据库及其应用第三章蛋白质组与蛋白质组学

第一节蛋白质组与蛋白质组学的定义

蛋白质组protein+genomeproteome01一种基因组所表达的全部蛋白质01一个细胞或一个机体的基因所表达的全部蛋白质01第一节蛋白质组与蛋白质组学的定义

阐明生物体全部蛋白质的表达模式与功能模式ACB从整体的角度分析、鉴定细胞内动态变化的蛋白质的组成、结构、性质、表达水平与修饰状态了解蛋白质之间、蛋白质与大分子之间的相互作用与联系,揭示蛋白质的功能与细胞生命活动的规律蛋白质组学一、蛋白质组与蛋白质组学的定义

第二节蛋白质组及其质点的分离与分析

分离纯化01.分析鉴定01.第二节蛋白质组及其质点的分离与分析

破碎细胞01蛋白质混合物的分离方法02蛋白质分离纯化的条件03选择材料04一、分离纯化

目的蛋白质的含量提取蛋白质的材料选择材料一、分离纯化

机械法物理法化学法一、分离纯化破碎细胞

根据蛋白质溶解度、分子大小及形状、电离性质、生物学功能的差异进行：根据溶解度根据分子量透析和超滤平衡离心凝胶过滤层析123一、分离纯化（三）蛋白质混合物的分离方法

01毛细管电泳离子交换层析根据电荷02亲和层析根据蛋白质的亲和能力一、分离纯化

1缓冲液2盐、金属离子和螯合剂3还原剂6蛋白质的环境因素温度储存5蛋白酶抑制剂表面效应4去垢剂一、分离纯化（四）蛋白质分离纯化的条件

图像分析技术01放射性核素标记亲和标签法02蛋白质芯片技术03质谱技术04Western印迹技术05二维凝胶电泳（2-DE）技术06其它方法07二、分析鉴定

二、分析鉴定Western印迹技术基本操作步骤：蛋白样品的制备SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白质的电转移蛋白质与抗体的结合反应目标蛋白质的显示western印迹基本步骤图示0102

二、分析鉴定logo（二）二维凝胶电泳（2-DE)技术目前蛋白质组研究中最有效的分析鉴定技术之一由两相组成：第一相：等电聚焦凝胶电泳(根据蛋白质电荷差异)第二相：SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳(根据蛋白质分子量差异)

分析鉴定2-DE技术原理

二、分析鉴定2-DE分析的基本步骤蛋白质溶解变性还原去除蛋白质杂志利用不同pK固定化电解质配置不同pH范围的凝胶利用软件设计配置第一相电泳(IPG－IFE)平衡第二相电泳(SDS－PAGE)考马斯亮蓝染色银染色铜染色样品制备IPG胶制备双相电泳染色

二、分析鉴定2-DE获得的蛋白质图谱

二、分析鉴定通过2-DE得到的蛋白质分离图谱，需要经过摄像或扫描转换为以像素为基础的、具有不同灰度强弱和一定边界方向的斑点电脑信号。(三)图像分析技术

012-DE图像分析软件包操作过程：02图像采集03斑点检测04背景消减05获得蛋白质相关信息06图像内及图像间的比较二、分析鉴定

放射性核素标记亲和标签法01正常细胞D0亲和标签02病理细胞D8亲和标签03混合并消化04生物素亲和纯化05液相色谱－质谱联用分析06测量两个不同样品中蛋白质的相对丰度07二、分析鉴定

二、分析鉴定蛋白质芯片技术

原理样品分子离子化后，根据不同离子间的质量和电荷比值（m/e）的差异确定分子量。应用蛋白质的序列分析研究蛋白质的修饰（六）质谱技术二、分析鉴定

核磁共振（NMR）、荧光光谱法测定溶液中蛋白质分子的结构Edman降解法测定蛋白质多肽的排列顺序X射线衍射分析法、小角中子衍射法测定晶体蛋白质的分子结构等（七）其它方法二、分析鉴定

第三节蛋白质相互作用的研究

蛋白质－核酸01蛋白质－蛋白质02第三节蛋白质相互作用的研究

蛋白质之间的相互作用力蛋白质相互作用的研究方法蛋白质-蛋白质相互作用的形式蛋白质－蛋白质

0102030405蛋白质亚基的聚合交叉聚合分子识别分子的自我装配多酶复合体蛋白质－蛋白质蛋白质-蛋白质相互作用的形式

氢键范德华力疏水键离子键01蛋白质－蛋白质02（二）蛋白质之间的相互作用力

酵母双杂交系统01噬菌体展示02生物传感芯片质谱03定点诱变技术04蛋白质－蛋白质（三）蛋白质相互作