氨基酸纸层析.pptVIP

2025/7/61实验一

氨基酸纸层析

2025/7/621、通过氨基酸的分离，学习并掌握纸层析的原理和操作技术；2、掌握分派层析法；3、掌握影响分派系数的原因。一、试验目的：

2025/7/63层析技术(chromatography色谱技术)一、发展史：层析分离技术在20世纪初就已得到应用：19用于植物色素的分离,多种色素以不一样的速率流动后形成不一样的色带而被分开，由此得名为“色谱法”1931年用氧化铝柱分离了胡萝卜素的两种同分异构体；1944年出现了以滤纸作为支持物的纸层析；20世纪六十年代末出现了高效液相色谱(HPLC)。

2025/7/64二、定义层析技术是根据被分离的混合物中各组分的理化性质（分子的形状和大小、分子极性、吸附力、分子亲和力、分派系数等）的不一样，使各组分在两相（一相为固定的，称为固定相；另一相流过固定相，称为流动相）中进行分派。层析的基本概念

2025/7/65固定相：固定相是层析的一种基质。它可以是固体物质（如吸附剂，凝胶，离子互换剂等），也可以是液体物质（如固定在硅胶或纤维素上的溶液）。流动相：在层析过程中，推进固定相上待分离的物质移动的液体、气体等，都称为流动相。柱层析中一般称为洗脱剂，薄层层析时称为展层剂。层析的基本概念

2025/7/66三、层析技术的种类1、按流动相的状态分类：（1）液相层析（色谱）（2）气相层析（色谱）；2、按固定相的使用形式分类：（1）柱层析（2）纸层析（3）薄层层析；3、按分离过程所重要根据的物理化学性质分类：（1）吸附层析（2）分派层析（3）离子互换层析（4）凝胶层析（5）亲和层析等。

2025/7/67纸层析法：是以滤纸作为惰性支持物的分派层析。滤纸纤维上羟基具有亲水性，因此吸附水作为固定相，一般把有机溶剂作为流动相。将样品点在滤纸上，进行展层，样品中的多种氨基酸在两相溶剂中不停进行分派。由于它们的分派系数不一样，不一样氨基酸随流动相移动的速率就不一样，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点不等的层析点二、试验原理:

2025/7/68分派层析法：运用物质在两种或两种以上不一样的混合溶剂中的分派系数不一样，而到达分离目的的一种试验措施。在一定条件下，一种物质在某种溶剂系统中的分派系数α是一种常数。溶质在固定相的浓度(Cs)分配系数α=溶质在流动相的浓度（Cl)

2025/7/69溶剂系统：正丁醇：甲酸：水=15：3：2固定相：水和滤纸纤维素有较强的亲和力，因而其扩散作用减少形成固定相;流动相：有机溶剂和滤纸亲和力弱，因此在滤纸毛细管中自由流动，形成流动相。由于混合液中多种氨基酸的α值不一样，因此移动速率（即迁移率Rf值）就不一样，从而到达分离的目的。

2025/7/610移动速率(比移值)：原点到层析点中心的距离Rf=原点到溶剂前沿的距离

2025/7/611影响Rf值的重要原因：Rf决定于被分离物质在两相间的分派系数以及两相间的体积比。由于在同一试验条件下，两相体积比是一常数，因此重要决定于分派系数。不一样物质分派系数不一样，Rf也就不一样。（1）物质的构造和分子极性：物质的构造不一样极性不一样，在两相中的溶解度也就不一样，物质的极性决定了物质在水和有机溶剂之间的分派系数，极性大的易溶于水中即固定相中，Rf小；反之,Rf则较大。

2025/7/612（2）层析溶剂：首先，溶剂的纯度要高。另一方面，溶剂系统选择应考虑被分离的物质在溶剂系统中的Rf在0.05～0.85。再次，溶剂系统必须新鲜配制，如正丁醇-甲酸-水系统久放易引起酯化。（3）pH值：溶剂、滤纸和样品的pH值都会影响物质的解离，从而影响物质的极性和溶解度，使Rf变化；

2025/7/613（4）滤纸：层析滤纸由高纯度棉花制成，规定滤纸要清洁，质地均一，厚薄一致，纤维松紧度适中，具有一定的机械强度，要被溶剂所饱和。不一样型号的滤纸，其厚薄程度、纤维松紧度各不相似，因此，滤纸纤维结合水的量不一样样，两相的体积比也就不一样，Rf也不一样；此外，滤纸的杂质也会影响Rf，必要时进行预处理（可用0.01～0.4M的HCl处理除去金属离子）.

2025/7/614（5）室验室的温度和时间: