荧光分光光度法.pptVIP

第1页，共28页，星期日，2025年，2月5日基本要求：了解荧光光谱法的基本原理和应用特点。了解荧光分光光度计的组成以及特点。掌握荧光光谱法的定量分析方法。了解影响荧光强度的因素。第2页，共28页，星期日，2025年，2月5日第一节概论回顾：四大类电化学分析法光学分析法色谱分析法其它分析方法原子光谱法分子光谱法X射线光谱法核磁波谱法紫外-可见光分光光度法荧光分光光度法红外吸收光谱法拉曼光谱法第3页，共28页，星期日，2025年，2月5日荧光粉(俗称夜光粉)，通常分为光致储能夜光粉和带有放射性的夜光粉两类。“荧光粉主要有增白作用，在纸张、包装袋、洗衣粉、塑料、纺织品等上常有应用，这也难怪塑料袋上检出荧光粉。”荧光粉的种类很多，现在市场上常见的就有500多个品种，性状各异，我们常用的Ａ4打印纸上就有荧光粉。第4页，共28页，星期日，2025年，2月5日一、应用：1.定量分析能产生荧光或能形成荧光配合物的物质。2.简单定性回答“是不是”。二、特点：灵敏度高，比吸收光谱法高103~104倍。ppb选择性比吸收光谱法好。第5页，共28页，星期日，2025年，2月5日第二节基本原理一、分子荧光的产生物质吸收光辐射价电子从基态跃到激发态，然后再回到基态释放能量⒈以热能的形式。⒉以光辐射的形式。以光辐射形式释放能量时，发射荧光。这种现象称为光致发光。荧光磷光无辐射跃迁激发态亚稳态（三重态）基态第6页，共28页，星期日，2025年，2月5日分子的去活化过程：第7页，共28页，星期日，2025年，2月5日当处于基态单重态（S0）的分子吸收波长为λ1和λ2的辐射后,分别被激发到第一激发单重态（S1*）和第二激发单重态(S2*)的任意振动能级上,而后发生以下过程：振动弛豫:在溶液中，受激的溶质分子与溶剂分子碰撞，而失去过剩的能量，以10-13~10-11s的极快速度，降至同一电子态的最低能级上，这一过程属于无辐射跃迁。内转换:当两个电子能级非常靠近以致其振动能级有重叠时，如第一激发单重态的较高振动能级与第二激发单重态的某一较低振动能级的位能相同，可发生电子由高电子能级以无辐射跃迁的方式跃迁至低能级上。此过程效率高，速度快，一般只需10-13~10-11s。荧光发射:处于激发单重态的最低振动能级的分子，也存在几种可能的去活化过程。若以10-9~10-7s左右的时间发射光量子回到基态的各振动能级，这一过程就有荧光发生。第8页，共28页，星期日，2025年，2月5日最常见的光致发光：荧光和磷光。两者发光机理不同，寿命不同。荧光寿命10-9～10-6秒，磷光寿命10-3～10秒。荧光可由激发态的分子产生，也可由激发态的原子产生，本章介绍分子荧光。由于荧光的产生由价电子引起，所以，荧光光谱属于电子光谱，其波长范围位于：紫外光区和可见光区。第9页，共28页，星期日，2025年，2月5日二、激发光谱和发射光谱⒈激发光谱固定荧光波长，以激发光波长对荧光强度(F)所作的光谱曲线。300350400λ(nm)F【例】硫酸奎宁（0.1mol/L硫酸溶液）的激发光谱。第10页，共28页，星期日，2025年，2月5日⒉发射(荧光)光谱固定激发光波长，以荧光波长对荧光强度F所作的光谱曲线。300350400λ(nm)F【例】蒽（乙醇溶液）的发射光谱。第11页，共28页，星期日，2025年，2月5日激发光谱和荧光光谱:硫酸奎宁的激发光谱和荧光光谱蒽的激发光谱和荧光光谱荧光物质的最大激发波长和最大荧光波长是鉴定物质的根据，也是定量测定时最灵敏的条件。第12页，共28页，星期日，2025年，2月5日三、分子荧光与分子结构的关系分子要产生荧光，首先要能吸收紫外光或可见光。能产生荧光的分子具有的结构特点：共轭双键刚性平面多环结构【例】芴具有刚性平面，产生的荧光比联二苯强。第13页，共28页，星期日，2025年，2月5日1具有共轭双键体系的分子：大多数荧光物质都具有芳香环或杂环，因为这些化合物都具有易发生π→π*或n→π*跃迁的电子共轭结构，π电子的非定域性越大，就越容易被激发，分子的荧光效率越大，因此凡能提高π电子共