3.2 基因工程的基本操作程序（第2课时） 课件（共32张PPT）人教版（2019）高中生物学选择性必修3.pptxVIP

;基因工程的基本操作程序（4个步骤）;目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化。;方法一：用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中;方法二：在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊。;农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。;任务：分析将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定

1.在用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞的过程中，一定要将目的基因插入到Ti质粒的T－DNA(可转移的DNA)上，原因是农杆菌中的Ti质粒上的T－DNA_________________________________________________

__________。;;第一次拼接;目的基因的表达载体提纯;;2.受体细胞的选择

(1)对于植物来说，受体细胞可以是受精卵或体细胞，因为植物细胞具有全能性。

(2)对于动物来说，受体细胞一般是受精卵，因为受精卵的全能性高，而高度分化的动物体细胞的全能性受到抑制。

(3)大肠杆菌和酵母菌在基因工程中都可以作为受体细胞，但又有所不同。大肠杆菌为原核细胞，而酵母菌为真核细胞(具有多种细胞器)，所以在生产需要加工和分泌的蛋白质时，酵母菌比大肠杆菌有优势。;生物种类;2.基因表达载体中具备标记基因(如抗生素抗性基因)，已经对受体细胞进行了筛选，基因工程的第四步还要对目的基因进行检测和鉴定，原因是：在含抗生素的选择培养基上能生长的可能是_________________________

，因此第四步需要对目的基因是否导入进行进一步的检测。此外，即便在选择培养基上能生长的细胞中导入的是基因表达载体，但是仍然不知道目的基因插入的等是否正确，能否正确，因此也需要在水平上进行检测和鉴定。;Bt基因;如：检测棉花的染色体DNA上是否插入了Bt基因或检测Bt基因;拓展基因探针是一段带有检测标记（荧光或同位素标记），且顺序已知的，与目的基因能互补的核酸序列（DNA或RNA）。;1.复制水平的检测(DNA分子杂交技术);(1)原理：碱基互补配对原??。

(2)基因探针：用放射性同位素或荧光物质标记的目的基因。

(3)检测受体细胞是否含目的基因的具体过程：;;RNA分子杂交(NorthernBlot)流程图;③检测目的基因是否翻译出相应蛋白质;目的基因是否表现出相应的性状;获取质粒、

噬菌体等载体;1.人工合成目的基因;2.从基因文库中获取;;如果用某种生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的多种互补DNA(也叫cDNA)片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，那么，这个受体菌群体就叫做这种生物的cDNA文库。;--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC---

--TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---;--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC---

--TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---;文库类型;网络构建