细胞总RNA提取及逆转录.pptxVIP

分子生物学实验1、每组同学做一份实验；2、遵守实验室规则，穿白衣；3、同学们在听课时要作好记录;4、上课时间。～欢迎大家参加分生实验课的学习！

考试形式本学期实验课占总成绩的比例由去年的15%提高到了30%！每次实验课为10分。具体包括：平时表现：2分。包括实验操作规范性、仪器设备使用、学习态度、课堂上回答问题、出勤率等。实验报告：4分。包括本次实验的原理及大体流程、实验结果、结果分析。3.随堂测试：4分。每次课布置1~2个思考题（每个实验室的思考题内容是一致的）。学生在实验报告的最后进行回答。交作业时间：最后一次实验课。学生交卷后签名。教师按学号排卷，每名同学的3个实验报告放在一起。缺实验课成绩者，本课程不予通过。

1.加样器2.离心机先介绍本轮实验中两种常用仪器的使用方法

、加样器的使用及注意事项3、根据取样量，选择合适量程的加样器。顶部标记加样器的最大量程，分别为：20?l:0.5~20?l100?l:20~100?l1000?l:200~1000?l1、用途——微量吸取液体2、每组3支加样器Q：如果要吸取5μl、50μl、150μl、500μl的液体，应选择哪个加样器?

4、如何调节？练习：加样器读数为100，实际体积各为多少?(1)首先观察目前的读数,假设为050:最大量程为20?l的加样器—5?l最大量程为100?l的加样器—50?l最大量程为1000?l的加样器—500?l(2)顺时针调节---读数变小逆时针调节---读数变大(3)注意：调节前，加样器读数正处于最大量程或最小量程时，如果向错误方向调节，马上会超出量程，将会损害加样器的精度。

5、加样器使用步骤：1）选择加样器,观察读数,调节读数。安装吸头要紧密(不要用手直接拿吸头)，安装后旋转固定一下。2）在液面外，先按到第一挡。3）将吸头插入液面下的适当深度:过深可能会腐蚀加样器,过浅可能会吸入空气。4）缓慢松开拇指,吸取液体。完全放开拇指后，停留半秒钟。急于离开液面，易吸入空气。5）抬起加样器,估计体积是否正确,将外壁液体用容器口引流回去6）贴容器内壁，加样器推到第二挡将液体匀速打出。(吸头内有液体时，不能将加样器平放或倒置，液体会倒流损坏加样器！)7)观察吸头内液体是否完全打出，将吸头弃于废物盒内。第一挡为实际读数体积，第二挡为帮助彻底打出液体，避免吸头内液体残留。

二、离心机的使用及注意事项1打开电源离心管中的液体为2/3,盖紧盖子,防止离心机被腐蚀。21代表转速盘上方的数据，2代表下方的数据。3将样品标记好并配平,对称放入离心机（管的连接处朝外）。设定离心的转速和时间。统一离心。4TeamWork

实验内容：实验一、细胞总RNA的提取及逆转录010203小鼠肝脏组织总RNA的提取RNA的变性琼脂糖凝胶电泳以总RNA为模板的逆转录反应

第一步：提取小鼠肝脏组织的RNA一、真核细胞的总RNA1、mRNA:1-5%5`鸟嘌呤7位甲基化—CH3修饰。1）免受核酸酶破坏，2）起始、促进蛋白质合成。3`poly(A)尾巴结构20--200个A.翻译所必需。起始密码：AUG终止密码：UAA,UAG,UGA。2、tRNA:10-15%3、rRNA:80-85%大亚基60S:28S=4718nt5S=120nt5.8S=160nt小亚基40S:18S=1874nt

二、RNA提取的注意事项RNA酶：广泛存在：灰尘、人体唾液、实验器材表面。生物活性非常稳定：耐热、耐酸、耐碱。1、尽量避免外源性RNase污染A.操作环境空气洁净。带手套、口罩。B.用新开封的化学试剂。（试剂应该专用）C.一次性塑料器材最好是新开封，